アセチル化ヒストンH3-K14 ウサギモノクローナル抗体 (Q16695/P68431)、WB、ChIP、ELISA用

主な製品仕様・パラメータ

生物学的背景：ヒストンH3の機能と局在

• ヒストンH3はクロマチンの基本単位であるヌクレオソームのコア構成要素であり、DNAをパッケージングするとともに、転写・複製・修復・染色体の安定性におけるDNAのアクセシビリティを制御しています。ヌクレオソームは、ヒストンオクタマー（H2A、H2B、H3、H4がそれぞれ2分子ずつ）に約146塩基対のDNAが巻き付いた構造をしています。
• ヒストンH3のリジン14のアセチル化（H3K14ac）は、活発に転写されている遺伝子やオープンクロマチン領域に関連する、よく研究されたエピゲネティックマークです。主にGCN5/PCAFなどのヒストンアセチルトランスフェラーゼによって触媒され、ブロモドメイン含有タンパク質に認識されます。 関連文献: PMID:16457588, PMID:16185088, PMID:16267050, PMID:17194708
• カノニカルヒストンH3.1（HIST1H3Aなど複数の遺伝子にコードされ、SWISS番号はP68431）はS期に複製依存的に発現し、ゲノム全体に沈着します。一方、ヒストンH3.1t（SWISS Q16695、遺伝子名H3-4/HIST3H3）は精巣特異的バリアントで、精子形成過程でカノニカルH3と置き換わります。
• H3.1とH3.1tはいずれも、K14を含むN末端領域を含め、配列同一性が非常に高いです。本抗体の免疫原はK14でアセチル化された合成ペプチドであるため、両方のバリアントにわたってこの修飾を特異的に認識することが保証されています。
• ヒストンH3の亜細胞局在は核であり、主に染色体に結合しています。H3.1tの組織特異性は精巣細胞に限られるのに対し、H3.1は遍在的に発現しています。

実験ガイド・技術的なヒント

• 免疫原の設計: 本抗体はヒトH3のK14周辺のアセチル化合成ペプチドに対して作製されており、アセチル化型に対する高い特異性が確保されています。非アセチル化ペプチドを用いた競合アッセイにより、修飾特異的な結合を確認することができます。
• ウェスタンブロッティング (WB): 標準的なSDS-PAGE条件下で、ヒストンH3は約15 kDaの位置に泳動されます。最適な検出のために、ヒストンタンパク質を濃縮するために核抽出物と弱酸抽出を使用することを推奨します。適切な陽性対照・陰性対照（例：ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤処理細胞 vs 未処理）を必ず含めてください。
• クロマチン免疫沈降 (ChIP): 本抗体はChIP用途に適合すると記載していますが、対象のゲノム領域や細胞種に応じて、架橋、クロマチンの剪断、抗体濃度の最適化が必要になる場合があります。
• 免疫蛍光法・免疫組織化学 (IF/IHC): 核染色が期待されます。パラフィン包埋切片（IHC-P）では、抗原賦活化処理が必要になることがあります。ブロッキングペプチドを使用するか、アイソタイプ対照と比較することで、抗体の特異性を検証してください。
• 種の反応性: K14周辺の配列保存性が高いため、本抗体はヒト、マウス、ラットと交差反応します。それ以外の種で使用する場合は、使用前に配列アライメントによる確認を行ってください。
• 全般: 本抗体はウサギモノクローナル抗体であるため、高い親和性、ロット間の一貫性、低いバックグラウンドを提供します。-20°Cで保管し、凍結融解の繰り返しを避けてください。

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