アセチル化ヒストンH4（K12）ウサギポリクローナル抗体（WB、IHC-P、IF/ICC、ELISA対応） - P62805

製品コア仕様・パラメータ

生物学的背景：ヒストンH4の機能と局在

ヒストンH4は、クロマチンの基本的な反復単位であるヌクレオソームを構成する4種類のコアヒストンの1つです。進化的に高度に保存された構造タンパク質として、核内でDNAをパッケージングし組織化する上で必須の役割を果たしており、遺伝子発現、DNA複製、修復、染色体の安定性に直接影響を与えています。

関連参考文献: UniProtKB P62805

ヒストンH4の機能は、「ヒストンコード」と総称される多種多様な翻訳後修飾（PTM）によって動的に制御されています。リジン12（K12、UniProt P62805ではK13に相当）をはじめとする特定のリジン残基のアセチル化は、クロマチン構造を調節し活発な転写を促進する重要なエピゲネティックマークであり、この残基のアセチル化は複数の研究で報告されています。

関連参考文献: PMID:17967882 PMID:2474456 PMID:7664735 PMID:19608861

ヒストンH4の細胞内局在は主に核内であり、染色体DNAと結合して存在します。K12のアセチル化のような特定のアセチル化パターンは、精子形成などのプロセスにおける局在の動態に影響を与えることが知られています。

関連参考文献: UniProtKB P62805

構造的には、ヒストンH4タンパク質の分子量は約11.4 kDaで、同一のタンパク質配列を生産する複数の遺伝子コピー（例：H4C1、H4C2など）によってコードされています。この多コピー性により、クロマチン集合に必要な高い発現量が確保されています。種を超えてヒストンH4の配列が極端に進化的に保存されているため、このタンパク質を標的とする抗体はしばしば幅広い交差反応性を示します。

実験ガイダンス・技術的なヒント

• 免疫原の設計: 本抗体はK12周辺のアセチル化合成ペプチドを免疫原として作製されています。特異的な検出を行うために、本抗体がアセチル化型を優先的に認識する可能性を考慮してください。脱アセチラーゼ阻害剤で処理したサンプルを用いた検証を行うことで、シグナルを向上させることができます。
• ウエスタンブロッティング（WB）: ヒストンH4は分子量が小さい（約11 kDa）ため、15%ゲルまたはグラジエントSDS-PAGEゲルを使用し、低分子タンパク質の喪失を防ぐために効率的な転写（例：低電圧での一晩ウェット転写）を確実に行ってください。適切な分子量マーカーを含め、必要に応じて非アセチル化ペプチド競合アッセイを用いて特異性を確認してください。
• 免疫組織化学（IHC-P）＆免疫蛍光（IF/ICC）: 抗原賦活化（例：クエン酸緩衝液、pH 6.0）によりエピトープのアクセシビリティが向上する場合があります。陽性対照組織として転写活性または増殖が活発な組織（例：精巣、胸腺）を使用し、標準プロトコルに従って内在性ビオチンまたはペルオキシダーゼのブロッキングを検討してください。
• ELISA: 定量分析を行う場合は、アセチル化H4ペプチドまたはヒストン抽出物をプレートにコーティングし、非アセチル化対照を用いてペプチド特異性を確認してください。
• 交差反応性: 本抗体はヒト、マウス、ラット、その他多くの種由来のアセチル化ヒストンH4と交差反応すると予測されています。特に本抗体はポリクローナルであるため、非アセチル化H4または他のアセチル化タンパク質への結合を除外するため、使用する実験系での検証を行ってください。
• 代替アプローチ: アセチル化K12マーク単独に対する高い特異性が要求される場合は、モノクローナル抗体と組み合わせるか、部位特異的競合アッセイを用いてエピトープ認識を確認することを検討してください。

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