アセチル化p53 (K370) ウサギモノクローナル抗体 (P04637) (ウエスタンブロットおよびELISA用)

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景: p53 (TP53) の機能と局在

p53 (細胞性腫瘍抗原p53, TP53) は、多機能性転写因子として働く、よく特徴づけられた腫瘍抑制タンパク質である。標的DNA配列に結合することで、細胞周期停止、DNA修復、またはアポトーシスを誘導し、それによりゲノム安定性を維持し、がん発生を防ぐ (PubMed:11025664, 12524540, 12810724, 15340061, 17317671, 24051492)。

関連参考文献: PMID:11025664, PMID:12524540, PMID:12810724, PMID:15340061, PMID:17317671, PMID:24051492

細胞内局在研究によると、p53は通常条件下では主に核内に存在するが、様々な細胞ストレスに応答して細胞質、ミトコンドリア、PMLボディ、小胞体へと移行することができる。この動的な区画化は、転写調節やアポトーシス誘導を含むその多様な機能にとって重要である (PubMed:15340061, 22726440, 11025664, 12810724, 17170702, 25168243, 27323408, 28842590)。

関連参考文献: PMID:15340061, PMID:22726440, PMID:11025664, PMID:12810724, PMID:17170702, PMID:25168243, PMID:27323408, PMID:28842590

p53はほとんどの組織で普遍的に発現しており、複数のアイソフォームは異なる発現パターンを示す。主要なアイソフォーム1は広く発現するが、他のアイソフォームは組織特異的に存在または欠如しており、調節の複雑さに一層を加えている (PubMed:16131611)。

関連参考文献: PMID:16131611

p53の活性は、リン酸化、アセチル化、メチル化、ユビキチン化を含む広範な翻訳後修飾 (PTM) によって厳密に制御されている。C末端調節ドメイン内のリジン370 (K370) はそのような修飾のホットスポットであり、SMYD2などの酵素によるメチル化やジメチル化を受け、p53の安定性と転写活性を調節する。この抗体は、ヒトp53 (P04637) のK370周辺の合成アセチル化ペプチドを用いて作製され、この残基のアセチル化型を特異的に認識する。K370でのアセチル化は、DNA結合能の増強およびp53標的遺伝子の活性化と関連しており、腫瘍抑制機能と結びついている。

関連参考文献: PMID:17108971, PMID:22864287 (K370でのメチル化/ジメチル化について)

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 本抗体はウサギで作製されたモノクローナル抗体であり、高い特異性とロット間の一貫性を保証します。
• ウエスタンブロッティングでは、p53は主に核内に存在するため、核タンパク質抽出物を濃縮することを検討してください。ただし、細胞ストレス条件によっては、p53は細胞質分画やミトコンドリア分画にも存在する可能性があります。
• 脱アセチル化酵素阻害剤 (例: トリコスタチンAまたはニコチンアミド) またはDNA損傷剤 (例: エトポシド、ドキソルビシン) で処理した細胞など、アセチル化p53を発現することが知られている陽性対照サンプルで抗体性能を検証してください。
• ELISAを使用する場合は、免疫原ペプチド (アセチル化) と非アセチル化対照ペプチドをプレートにコーティングして特異性を確認してください。
• 交差性はヒトおよびマウスで確認されていますが、他の種を試験する場合は配列アラインメントを考慮してください。
• 使用希釈率は経験的に最適化してください。推奨開始希釈率は、WB: 1:500〜1:2000、ELISA: 1:1000〜1:5000 (エンドユーザーによる滴定が必要) です。

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