ウエスタンブロット、IHC-P、ELISA用 抗APOA1ウサギポリクローナル抗体 - P02647

中核製品仕様とパラメータ

生物学的背景：アポリポタンパク質A-Iの機能と局在

• アポリポタンパク質A-I（ApoA-I）は、血漿高比重リポタンパク質（HDL）の主要なタンパク質成分であり、キロミクロンにも存在し、コレステロール恒常性の中心的役割を果たします。
• 末梢組織からのコレステロール流出を促進し、レシチン-コレステロールアシルトランスフェラーゼ（LCAT）の必須補因子として作用することで、逆コレステロール輸送を媒介します。LCATはコレステロールをエステル化し、HDL粒子へのパッケージングを行います。
• ApoA-Iは分泌タンパク質であり、主に肝臓と小腸で合成された後、循環血中に放出され、脂質粒子と結合します。
• 遺伝子APOA1は、染色体11上のアポリポタンパク質A1/C3/A4/A5遺伝子クラスターに属し、前駆体タンパク質をコードしています。これはプロテオリティックなプロセシングを受け、成熟した243アミノ酸のタンパク質を産生します。
• 翻訳後修飾には、Met-110およびMet-136での酸化が含まれます。これらの酸化は、喫煙やeNOS遺伝子変異体などの冠状動脈疾患リスク因子を持つ個体で増加しています。また、このタンパク質は糖化、ニトロ化、パルミトイル化されることもあります。
• ApoA-Iは、特定の変異体がアミロイド線維を形成するアミロイドーシスや、酸化型が大動脈病変で濃縮され疾患重症度と相関する動脈硬化に関与しています。
• SPAP複合体の一部として、ApoA-Iは精子運動性を活性化し、脂質輸送を超えた肝外機能を示しています。
• 脂質代謝におけるこのタンパク質の重要性は、HDLレベルおよび心血管疾患との関連性によって強調されており、主要なバイオマーカーおよび治療標的となっています。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原はアミノ酸25–267に及び、これはヒトApoA-Iの成熟分泌型に対応します。関連する生物学的サンプル（例：血清、血漿、または肝臓ライセート）における内因性タンパク質に対する反応性を確認することを検討してください。
• ウエスタンブロットでは、予測される分子量は約28 kDaです。ヒト、マウス、ラットのサンプルでこのサイズ付近のバンドが確認されれば、交差反応性が確認されます。血漿または血清を使用する場合は、脂質の干渉を減らすためにサンプル調製を最適化してください。
• 免疫組織化学染色（IHC-P）では、ApoA-Iは細胞外に存在するため、適切な抗原賦活化を用いて、パラフィン包埋肝臓または動脈硬化性動脈組織切片で抗体をテストしてください。軽度の抗原賦活化条件が必要な場合があります。
• ELISAでは、抗体をキャプチャー試薬または検出試薬として使用する場合、サンドイッチ法で抗体ペアを検証してください。ポリクローナル性は信号増幅をもたらす可能性がありますが、注意深い滴定が必要です。
• ApoA-Iの酸化型を扱う際は、メチオニンの酸化がエピトープ認識を変化させる可能性があることに注意してください。還元剤と新鮮なサンプルの使用が推奨されます。

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