WB、IF/ICC、IP、ELISA用 抗APTXウサギポリクローナル抗体 - Q7Z2E3

中核製品仕様とパラメータ

生物学的背景：APTXの機能と局在

• アプラタキシン（APTX）は、フォークヘッド関連ドメイン ヒスチジン三量体様タンパク質（FHA-HIT）としても知られ、一本鎖DNA切断修復、二本鎖DNA切断修復、塩基除去修復に関与するDNA結合タンパク質である（PubMed:15044383, PubMed:15380105, PubMed:16964241）。5'-リン酸末端からアデニル酸基を遊離させる反応を触媒することで、異常なDNAライゲーション中間体を解消し、効率的に再結合可能な5'-リン酸末端を生成する（PubMed:16964241, PubMed:17276982, PubMed:24362567）。 関連参考文献: PMID:15044383, PMID:15380105, PMID:16964241, PMID:17276982, PMID:24362567

• APTXは、アデノシン5'-モノホスホラミド（AMP-NH(2)）およびジアデノシン四リン酸（AppppA）も加水分解するが、触媒活性は低い（PubMed:16547001）。3'結合型グアノシンまたはイノシンDNA付加体と比較して、5'結合型アデノシン（AppDNA）に対してより高い特異的活性を示す（相同性による）。 関連参考文献: PMID:16547001

• このタンパク質は主に核（核質および核小体を含む）に局在するが、細胞質でも検出される。

• APTXは亜鉛フィンガードメインとFHAドメインを含み、活性には金属イオン結合が必要である。リン酸化を受ける（リン酸化タンパク質キーワード）。

• アイソフォーム1は、アイソフォーム2と比較して大脳皮質および小脳で高発現している。APTXは、肝臓、腎臓、リンパ節、骨格筋、線維芽細胞、リンパ球、膵臓などの組織で広範に発現している（PubMed:14755728, PubMed:11586299, PubMed:11586300, PubMed:15276230）。 関連参考文献: PMID:14755728, PMID:11586299, PMID:11586300, PMID:15276230

• APTXの変異は、神経変性疾患である眼運動失行を伴う失調症タイプ1（AOA1）を引き起こし、神経細胞のDNA修復におけるその必須の役割を強調している。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原（ヒトAPTXのアミノ酸93-342を含む組換えタンパク質）は触媒HITドメインをカバーしているため、得られたポリクローナル抗体は両方のアイソフォームを認識する可能性がある。サンプル系におけるアイソフォームの検出を確認すること。
• ウエスタンブロット（WB）では、予測分子量は41 kDaであるが、翻訳後修飾によりわずかなシフトが生じる可能性がある。適切な陽性対照（例：HeLa、HEK293ライセート）を使用し、可能であればsiRNAノックダウンで検証すること。
• 免疫蛍光法（IF/ICC）では、核小体の濃縮の可能性がある核染色を期待できる。局在を確認するために核小体マーカー（例：フィブリラリン）との共染色を行うこと。
• 免疫沈降法（IP）では、この抗体はAPTXおよびDNA修復に関与するその相互作用タンパク質を捕捉する可能性がある。タンパク質複合体を保持するために溶解バッファー条件（例：塩濃度、界面活性剤）を最適化すること。
• ELISAアプリケーションは、組換えAPTXタンパク質またはペプチドを標準品として使用して開発できる。最適なS/N比を得るために抗体の希釈系列を検討すること。
• この抗体はヒトに対する反応性で検証されている。他の種との交差反応性は未決定である。非ヒトサンプルを使用する場合は、免疫原領域の配列アラインメントを推奨する。

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