WB、IF/ICC、ELISA用抗ARF5モノクローナル抗体 - P84085

主な製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：ARF5の機能と局在

• ADP-リボシル化因子5（ARF5）は小さなGTP結合タンパク質で、活性型のGTP結合状態と不活性型のGDP結合状態の間で循環し、細胞内輸送における分子スイッチとして機能します。
• ARF5はタンパク質輸送において中心的な役割を持ち、ゴルジ装置での小胞の出芽と脱被覆に寄与しています。
• mTORC1複合体の形質膜皺への動員を促進することでmTORC1活性を制御し、PI3K/Aktシグナル伝達経路を介した活性化を促進します。 関連参考文献: PMID:36735494
• ARF5はリソソーム損傷に対する初期応答因子として作用し、リソソーム品質管理経路に関与します。 関連参考文献: PMID:41293316
• 微生物感染において、ARF5はADP-リボシルトランスフェラーゼであるコレラ毒素触媒サブユニットのアロステリック活性化因子として機能します。
• ARF5はゴルジ装置（トランスゴルジネットワーク膜）、細胞膜、細胞質（核周辺領域）、リソソーム膜を含む複数の細胞区画に局在しており、動的な輸送機能を持つことを反映しています。
• ミリストイル化リポタンパク質であり、N末端にミリストイル基が結合していることから、膜との会合が促進されていると考えられています。
• このタンパク質の計算上の分子量は約20.5 kDaで、低分子GTPアーゼのARFファミリーに属します。

実験ガイダンスと技術的なヒント

• 免疫原はヒト、マウス、ラット間で保存されているヒトARF5のアミノ酸81～180番に対応しているため、本抗体はこれらの種のARF5を検出できる可能性がありますが、実験系ごとに交差反応性の検証を行ってください。
• ウエスタンブロット（WB）では、ARF5は約21 kDaの位置に予測されます。適切な陽性対照（例：HeLa、HEK293細胞溶解物）を使用し、siRNAまたはノックアウトによる検証でバンド特異性を確認することを推奨します。
• 免疫蛍光（IF/ICC）では、ARF5はゴルジ体と細胞質小胞に局在します。ゴルジ体マーカーに合わせて固定・透過処理条件を最適化し、オルガネラマーカーとの共染色を推奨します。
• ELISAでは、本抗体は検出試薬または捕捉試薬として使用可能です。サンドイッチELISAを構築する場合は、適切なARF5抗体ペアと組み合わせる必要がある場合があります。
• ARF5はミリストイル化された膜結合タンパク質であるため、穏やかな界面活性剤を含む抽出バッファーを使用することで、エピトープ認識を損なうことなく溶解性が向上する可能性があります。

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