WB、IF/ICC、ELISA用抗ATG12ポリクローナル抗体 - O94817

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：ATG12の機能と局在

• ユビキチン様タンパク質ATG12（APG12様とも呼ばれる）は、オートファジー経路の主要な構成因子であり、オートファゴソームの形成に不可欠です。
• ATG12は、ATG7（E1様）およびATG10（E2様）が関与するユビキチン様システムを介してATG5と結合します。その後、ATG12-ATG5結合体はE3様酵素として機能し、ATG8ファミリータンパク質の脂質化および膜への結合を促進します。
• ATG12-ATG5複合体はATG16L1とともに、ストレスを受けたリソソームへのLRRK2の動員およびリソソームストレスに応答したLRRK2キナーゼ活性の誘導に必要です（類似性に基づく）。
• 細胞内では、ATG12は細胞質およびオートファゴソーム前駆体構造の膜に局在し、オートファジー初期段階における役割と一致しています。
• ATG12はヒト組織全体で広く発現しており、細胞恒常性における基本的な役割を反映しています。
• 翻訳後修飾にはアセチル化およびATG5とのイソペプチド結合の形成が含まれます。選択的スプライシングにより複数のアイソフォームが産生されており、3D構造も解明されています（プロテオミクスによる同定、リファレンスプロテオーム、Ubl結合経路）。
• ウイルス感染時、ATG12はウイルス増殖促進因子として機能します。ATG5-ATG12結合体は、VSV感染時のI型IFN産生を障害することで自然抗ウイルス免疫応答を負に制御します。また、侵入したHCV RNAの翻訳および複製開始にも必要ですが、感染成立後の感染維持には必要ありません。 関連文献： PMID:17709747 PMID:19666601

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原は、ヒトATG12のN末端領域（アミノ酸1～100）由来の合成ペプチドです。サンプルの種類におけるエピトープのアクセシビリティの確認を検討してください。WBでは、標準的な抗原賦活化は必要ない場合があります。
• ウェスタンブロッティングでは、単量体ATG12について約15 kDaのバンドが予想されます。ATG12-ATG5結合体は、非還元条件下でより高い分子量として検出される場合があります。各形態を識別するため、適切な対照を含めてください。
• 免疫蛍光/ICCでは、細胞質および点状の染色パターン（オートファゴソーム前駆体構造）が予想されます。オートファジーマーカー（例：LC3）との共染色により、特異性の確認に役立ちます。
• このポリクローナル抗体はマウスおよびラットのATG12と交差反応するため、種間研究に適しています。必ず対象となる種のバックグラウンドでバリデーションを行ってください。
• すべてのポリクローナル抗体と同様に、ロット間差が生じる可能性があります。各実験に陽性対照および陰性対照を含め、シグナル対ノイズ比を最適化するための滴定を検討してください。

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