WB、IF、ELISA用 抗ATG4B ウサギモノクローナル抗体 - Q9Y4P1

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景: ATG4Bの機能と局在

• ATG4B (APG4B、AUTL1、autophagin-1としても知られる) は、マクロオートファジー、非古典的オートファジー、ミトファジーに必須なATG8ファミリータンパク質のプロテオリティックプロセッシングと脱脂質化を媒介することでオートファジーを調節する重要なシステインプロテアーゼである。 関連文献: PMID:15169837, PMID:15187094, PMID:17347651, PMID:33773106, PMID:33909989

• ATG4Bは、ATG8ホモログ (MAP1LC3A/B/C, GABARAP, GABARAPL1/2) のC末端アミノ酸を切断し、保存されたグリシンを露出させる。これは、それらがホスファチジルエタノールアミン (PE) に結合し、オートファゴソーム膜に挿入されるための前提条件である。 関連文献: PMID:15169837, PMID:15187094, PMID:17347651

• ATG4Bはまた、脱脂質化酵素として作用し、ATG8タンパク質からPEを脱共役させてそのリサイクルを促進する。加えて、非古典的オートファジー中に単層膜構造上のATG8タンパク質をプロセスする。 関連文献: PMID:15187094, PMID:19322194, PMID:29458288, PMID:33909989

• ミトファジーにおいて、ATG4Bは、そのプロテアーゼ活性とは独立して、ATG9Aのミトコンドリアへの輸送を調節し、脂質転送のためのER-ファゴフォア接触を可能にすることで、ファゴフォアの成長を促進する。 関連文献: PMID:33773106

• 4つの哺乳類ATG4パラログ (ATG4A–D) の中で、ATG4BはATG8活性化の主要なプロテアーゼであるが、ATG4AおよびATG4Dと比較して相対的に弱い脱脂質化活性を示す。 関連文献: PMID:29458288, PMID:30661429

• 細胞内局在に関して、ATG4Bは細胞質、サイトゾル、オートファゴソーム、小胞体、ミトコンドリアに局在し、オートファジーおよび関連経路におけるその多面的な役割と一致する。

• アセチル化、リン酸化、S-ニトロシル化、糖化を含む翻訳後修飾が報告されており、その酵素活性と細胞内分布を調節する可能性がある。

実験ガイドラインと技術的ヒント

• 免疫原は、ヒトATG4Bの残基200-300内のペプチドに対応しており、この領域は触媒ドメインに位置する。抗体反応性は、翻訳後修飾またはコンフォメーション状態の影響を受ける可能性がある。
• ウェスタンブロッティングでは、ATG4Bは約44 kDaで移動する。内在性レベルは変動する可能性があるため、検出感度を高めるためにオートファジー誘導剤 (例: 飢餓、ラパマイシン) の使用を検討すること。
• 免疫蛍光法では、ATG4Bは点状の細胞質分布を示し、ミトファジー条件下ではオートファゴソームマーカー (例: LC3) およびミトコンドリアマーカーと共局在する可能性がある。ノックアウト細胞株で特異性を検証すること。
• 本抗体はマウスおよびラットATG4Bと交差反応することが報告されている。ただし、他の種については免疫原領域の配列アラインメントを確認すべきである。
• ELISAは定量に使用可能である。マッチした抗体ペアを用いたサンドイッチELISA形式を検討すること。

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