ウエスタンブロット、IHC-P、ELISA用 抗ATP7B ウサギポリクローナル抗体 - P35670

中核製品仕様とパラメーター

生物学的背景: ATP7Bの機能と局在

• タンパク質の同定: ATP7B（別名: 銅輸送ATPase 2、ウィルソン病関連タンパク質）は、ATP7B遺伝子 (GeneID 540) によってコードされる銅輸送P型ATPaseです。重金属輸送ATPaseのP1Bサブファミリーに属します。
• 中核機能: ATP7Bは、細胞からのATP依存性の銅輸送を仲介し、銅恒常性の維持に重要です。肝細胞では、特に細胞内銅濃度が上昇した条件下で、胆汁中への銅の排出を促進し、毒性のある蓄積を防ぎます。
• 細胞内局在: 基礎的な銅条件下では、ATP7Bは主にトランスゴルジネットワーク (TGN) 膜に存在し、銅酵素に銅を供給します。銅過剰負荷時には、細胞質小胞や細胞膜、後期エンドソーム、ミトコンドリアへと移行し、過剰な銅を排出します。
• 組織発現: ATP7Bは肝臓と腎臓で最も豊富に発現し、脳では低い発現レベルです。脳特異的アイソフォーム（アイソフォーム2）およびプロテオリシスにより切断された140 kDaの形態 (WND/140 kDa) も検出されます。
• 翻訳後修飾と調節: 本タンパク質はリン酸化や選択的スプライシングを受け、リボソームフレームシフトにより追加のバリアントが生成される可能性があります。これらの修飾はその輸送と触媒活性に影響を与えます。
• 臨床的関連性: ATP7Bの変異は、常染色体劣性遺伝疾患であるウィルソン病 (WD) を引き起こします。この疾患は肝臓と脳における銅蓄積を特徴とし、肝臓および神経症状を引き起こします。本抗体はC末端近傍領域 (アミノ酸1251-1351) を標的としており、フルレングスおよび切断型の両方を検出する可能性があります。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原の設計: 免疫原はC末端領域のアミノ酸1251–1351にまたがり、この領域は種間でよく保存されています（マウスおよびラットとの交差反応性の説明になります）。トポロジーモデルに基づき、この領域は細胞質側に位置すると予測され、フルレングスおよびC末端断片の両方を認識する抗体が得られる可能性があります。
• ウエスタンブロッティング: ATP7Bの予測分子量は約157 kDaです。高分子量タンパク質に対しては、低濃度ゲル（例: 6–8%）を使用し、適切な転写条件（例: メタノール還元を伴うウェット転写）を確保してください。本抗体は肝臓や細胞株において、切断型の140 kDa形態 (WND/140) も検出する可能性があります。
• IHC-P: 抗原賦活化（例: 熱処理によるクエン酸緩衝液またはEDTA緩衝液）を最適化し、適切な対照（例: 肝組織を陽性対照、アイソタイプコントロール）を含めてください。肝細胞での染色はTGNに局在し、銅負荷条件下では再分布を示すはずです。
• ELISA: 組換え免疫原は定量的アッセイの標準として使用できます。銅負荷またはATP7B過剰発現リサートを用いて、直線性と感度を検証してください。

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