WB、IHC-P、ELISA用抗ベータ2ミクログロブリンポリクローナル抗体 - P61769

製品の主要仕様およびパラメータ

生物学的背景：ベータ2ミクログロブリンの機能と局在

• ベータ2ミクログロブリン（B2M）は、クラスI主要組織適合性複合体（MHC I）の軽鎖であり、ペプチド抗原をCD8+ T細胞に提示するために不可欠です。そのため、適応免疫において重要な役割を果たします。
• 分泌タンパク質である一方、MHC Iの重鎖と非共有結合的に結合した状態で細胞表面にも存在します。そのフォールディングと構築は、安定したMHC I発現に重要です。
• 外因性の結核菌（Mycobacterium tuberculosis）EsxAタンパク質はB2Mに結合し、細胞表面への輸送を低下させることで、クラスI抗原提示を損なう可能性があります（PubMed:25356553）。
  関連文献： PMID:25356553
• 構造的に、B2Mは免疫グロブリン様ドメインを含み、分子内ジスルフィド結合（Cys25-Cys80）によって安定化されています。糖タンパク質であり、糖化やN末端ピログルタミン酸形成などの翻訳後修飾を受けます。
• B2Mの変異は、家族性高異化性低タンパク血症およびアミロイドーシスと関連しています。後者では組織内、特に透析関連アミロイドーシスにおいて線維状沈着物を形成することがあります。
• ベータ2ミクログロブリンは小さなタンパク質（理論値約13.7 kDa）ですが、還元条件下のSDS-PAGEでは約14 kDaとして検出されます。

実験ガイダンスおよび技術上のヒント

• 免疫原はシグナルペプチドを除く成熟分泌型（アミノ酸21～119）に相当します。この抗体は還元型および非還元型のB2Mの両方を認識する可能性がありますが、一貫した結果を得るため、ジスルフィド結合を切断する変性・還元条件（例：DTT存在下、95°Cで加熱）でバリデーションを行ってください。
• ウエスタンブロットでは、総細胞溶解液または濃縮血清を10～30 µgロードし、リンパ球に富む組織（脾臓、リンパ節）またはMHC Iを発現する細胞株などを陽性対照として使用してください。
• ホルマリン固定パラフィン包埋（IHC-P）切片の免疫組織化学では、クエン酸緩衝液（pH 6.0）またはEDTA緩衝液（pH 9.0）を用いて抗原賦活化を行い、染色強度を最適化するために抗体濃度の滴定試験を検討してください。
• 本抗体はマウスおよびラットのB2Mと交差反応するため、げっ歯類モデルに適しています。種間の配列相同性を確認し、関連組織の溶解液を試験して種反応性を検証してください。
• ELISAでは、捕捉抗体または検出抗体として使用できます。異なるエピトープを認識する別のクローンと組み合わせることで、サンドイッチアッセイの感度が向上する可能性があります。コーティング緩衝液および希釈倍率を最適化してください。
• B2Mは分泌されるため、無細胞サンプルを分析できます。低存在量の標的では、免疫沈降による濃縮またはサンプル濃縮が必要になる場合があります。

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