ウエスタンブロット、IF/ICC、ELISA用 抗CADウサギモノクローナル抗体 - P27708

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：CADの機能と局在

• CADは、ピリミジン新生合成経路の最初の3つの活性（カルバモイルリン酸合成酵素 (CPSase)、アスパラギン酸カルバモイル転移酵素 (ATCase)、ジヒドロオロターゼ (DHOase)）をコードする大きな多機能酵素です。
• CPSase活性には、アンモニアを生成するグルタミン依存性アミドトランスフェラーゼ (GATase) ドメインが関与し、生成されたアンモニアは合成酵素ドメインによってATPと重炭酸塩からカルバモイルリン酸を生成するために使用されます。
• 生成されたカルバモイルリン酸はATCase活性部位へとチャネリングされ、L-アスパラギン酸からカルバモイル-L-アスパラギン酸の形成を触媒します。
• 最後に、DHOaseドメインがカルバモイルアスパラギン酸を環化して、UMP合成の前駆体であるジヒドロオロターゼを形成します。
• CADは細胞質と核の両方に局在しています。
• CADの翻訳後修飾には、その活性と経路フラックスを調節するアセチル化とリン酸化が含まれます。
• CAD遺伝子の変異は、先天性糖鎖化異常症 (CDG1Z) および発達性およびてんかん性脳症 (DEE50, EIEE50) と関連しています。
• このタンパク質の分子量は約243 kDaで、ATP、金属イオン（マグネシウム、マンガン、亜鉛）、およびヌクレオチドに対する結合部位を持つ複数のドメインを含みます。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原は、ヒトCADのN末端領域（アミノ酸1–100）に対応する合成ペプチドであり、おそらくGATaseドメインを標的としています。関連する細胞モデルで特異性を確認してください。
• 243 kDaタンパク質のウエスタンブロット検出には、低パーセンテージ（例：6–8%）のポリアクリルアミドゲルと、効率的な転移を確保するための長時間転移を使用してください。
• IF/ICCでは、細胞質および核内プールの両方を検出するために、4% PFA固定と0.1% Triton X-100透過化処理を検討してください。
• ELISAでは、抗体は直接法またはサンドイッチ法で適用できます。陽性対照として免疫原ペプチドを含めてください。
• 内在性CAD発現は細胞種によって異なります。HeLaやHEK293細胞などの実験系で抗体を検証してください。
• ヒト以外の種との交差反応性は確認されていません。非ヒトサンプルをテストする場合は、配列アライメントを実施してください。

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