WB、ELISA用 抗Cas9ウサギモノクローナル抗体 - Q99ZW2

製品の主要仕様とパラメータ

生物学的背景: Cas9の機能と局在

• Cas9 (CRISPR関連エンドヌクレアーゼ Cas9/Csn1) は、Streptococcus pyogenes のタイプII CRISPR-Cas適応免疫系のエフェクタータンパク質として機能するRNAガイド型DNAエンドヌクレアーゼです。
  関連参考文献: PMID:21455174
• CRISPR干渉経路において、Cas9はCRISPR RNA (crRNA) およびトランス活性化crRNA (tracrRNA) と複合体を形成します。この二重RNAガイド複合体は、crRNAスペーサー配列に相補的な二本鎖DNA標的を認識し切断します。
• 標的の認識と切断には、標的部位の直下に短いプロトスペーサー隣接モチーフ (PAM) 配列 (SpCas9の場合 5’-NGG-3’) が必要です。PAM認識は触媒活性に必須であり、自己と非自己DNAの識別に寄与します。
  関連参考文献: PMID:24476820
• DNA切断以外に、Cas9はcrRNAの成熟にも関与します。tracrRNAおよび宿主リボヌクレアーゼIIIと共に、pre-crRNA:tracrRNA二本鎖を安定化し正しいプロセシングを行いますが、Cas9自体はRNA切断に触媒的役割を持ちません。
  関連参考文献: PMID:24270795
• Cas9はDNA結合、エンドヌクレアーゼ、およびエキソヌクレアーゼ活性を持つ多ドメインタンパク質です。そのヌクレアーゼ機能にはマグネシウムやマンガンなどの二価金属イオンを必要とします。
• 高分解能で構造解析されたCas9は、RNA結合、DNA巻き戻し、および2つのヌクレアーゼドメイン (RuvCおよびHNH) による協調的切断を可能にするコンフォメーション柔軟性を示します。
• Cas9の天然の分子量は約158 kDaであり、その大きな多ドメイン構造と一致します。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原は Streptococcus pyogenes Cas9 のアミノ酸450–730からなり、RuvCヌクレアーゼドメインの一部を含む領域です。この抗体は天然および変性Cas9タンパク質の両方を認識する可能性があることを考慮してください。
• ウェスタンブロッティングでは、全長Cas9の予測分子量は約158 kDaです。関連するサンプル系 (例: S. pyogenes ライセートまたはSpCas9を発現する形質転換細胞株) での反応性を検証してください。
• ELISAを開発する際は、組換えCas9タンパク質または細胞抽出物に対する抗体の性能を評価してください。示されている交差反応性 (ヒト、その他) は、外来性Cas9を発現するヒト細胞株や組織を用いた応用の可能性を示唆しています。

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