WB、IP、IF/ICC、ELISA用抗カスパーゼ8ウサギモノクローナル抗体 - O89110

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：カスパーゼ8の機能と局在

• カスパーゼ8はプログラム細胞死の分子スイッチとして機能するチオールプロテアーゼで、アポトーシス、ネクロプトーシス、ピロプトーシスのシグナルを統合し、発生期および成体における組織損傷を防いでいます。 関連参考文献: PMID:12065591 PMID:18455983 PMID:30361383
• 外因性アポトーシス経路における開始因子カスパーゼとして作用し、FADDを介して死受容体（FAS/CD95、TNFRSF1A）に補充されて死誘導シグナル複合体（DISC）を形成します。ここでタンパク質分解的に活性化された後、下流のエフェクターカスパーゼ（CASP3、CASP6、CASP7）とBIDを切断し、ミトコンドリアからのシトクロムC放出を引き起こします。 関連参考文献: PMID:24813849 PMID:24813850 PMID:9654089 PMID:9727491 PMID:9727492
• カスパーゼ8はRIPK1のAsp-325を切断することでネクロプトーシスを負に制御します。これはRIPK1の自己リン酸化を防ぎ、TNF誘導性の細胞死と炎症を抑制する重要な事象です。 関連参考文献: PMID:31511692
• 特定の条件下（例：TAK1阻害時）では、カスパーゼ8はガスダーミンC（GSDMC）とガスダーミンD（GSDMD）を切断・活性化することでピロプトーシスを開始し、細胞膜に孔を形成させて溶解型細胞死を引き起こします。 関連参考文献: PMID:30361383 PMID:30381458
• 自然免疫においても機能し、TLR3およびTLR4の下流で負の制御因子N4BP1を切断して不活性化することで、サイトカイン産生を促進します。 関連参考文献: PMID:32971525
• カスパーゼ8は主に細胞質に存在しますが、核に局在することもあります。発現は全身に広く、脾臓、胸腺、肺、肝臓、腎臓で最も発現量が高く、心臓、脳、精巣、骨格筋では低い発現量を示します。
• このタンパク質はアセチル化とリン酸化を受け、不活性なザイモゲンとして合成され、完全な活性化には二量体化と切断が必要です。システイン依存性アスパラギン酸指向性プロテアーゼのペプチダーゼC14Aファミリーに分類されます。

実験ガイダンスと技術的なヒント

• 本抗体の免疫原はマウスカスパーゼ8の1～218残域をカバーしており、N末端プロドメインを含んでいます。本抗体は完全長および部分プロセシング型の両方を認識する可能性があるため、検出戦略を設計する際にはこの領域を考慮してください。
• ウエスタンブロットでは約55 kDaの位置にバンドが検出されることが予想されますが、アポトーシス誘導後にはより小さな切断断片が出現する場合があります。使用する細胞系に適した陽性コントロールと陰性コントロールを用いて特異性を検証してください。
• 免疫沈降および免疫蛍光／ICCは、本ウサギモノクローナル抗体と適合します。細胞内標的の場合は固定・透過処理工程を最適化し、アイソタイプコントロールを含めてください。
• ELISAでは、サンドイッチ法における捕捉抗体または検出試薬として使用できます。組換えタンパク質標準を用いて性能を確認し、直線性と感度を確立してください。

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