WB、FC、ELISA用抗CD16bウサギモノクローナル抗体 - O75015

製品の主要仕様およびパラメータ

生物学的背景：CD16bの機能と局在

• CD16b（FcγRIIIB）は、FCGR3B遺伝子によってコードされる免疫グロブリンγのFc領域に対する低親和性受容体です。膜貫通ドメインを持たないグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型糖タンパク質であり、この点でFcγRIIIAと区別されます。
• この受容体は、複合体化または凝集したIgGおよび単量体IgGに結合しますが、FcγRIIIAとは異なり、抗体依存性細胞傷害（ADCC）や貪食を媒介しません。好中球を活性化することなく末梢循環中の免疫複合体を捕捉する、おとり受容体として機能すると考えられています。
• CD16bは多形核白血球（好中球）および刺激を受けた好酸球に特異的に発現し、顆粒球における自然免疫監視における役割を示しています。
• 細胞内局在として、CD16bは細胞膜上に存在し、GPIアンカーの切断によって分泌型として放出されることがあります。
• このタンパク質は2つの免疫グロブリン様ドメインを含み、高度に糖鎖修飾されています。予測分子量は約26 kDa（コアタンパク質26,243 Da）で、糖鎖修飾により拡散したバンドとして観察されることがよくあります。
• 主な構造的特徴には、N末端シグナルペプチド（aa 1-18）、細胞外IgG結合ドメイン（aa 20-208、免疫原として使用）、およびC末端GPIアンカー付加部位が含まれます。複数の別名（CD16、FCG3、FCGR3、FCR-10、FCRIII）は、過去の命名法を反映しています。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原はヒトCD16bの細胞外IgG結合ドメイン全体（aa 20-208）をカバーしており、さまざまなアプリケーションでネイティブタンパク質と変性タンパク質の両方を検出するのに適しています。
• ウエスタンブロット（WB）では、還元条件下で約26 kDaのバンドが予想されます。糖鎖修飾により、スメアまたは拡散したバンドが生じることがあります。適切な陽性対照（例：好中球ライセート）で検証し、明瞭なバンドが必要な場合は脱糖鎖処理を検討してください。
• フローサイトメトリー（FC）では、生細胞かつ未固定の好中球表面に発現するCD16bを検出するため、適合する蛍光色素結合二次抗体を使用してください。GPIアンカー型タンパク質の完全性を変化させる可能性のある固定法は避けてください。
• ELISAでは、本抗体を捕捉試薬または検出試薬として使用できます。サンドイッチ形式では、競合しない抗CD16bクローンとの組み合わせが推奨されます。また、組換えまたは精製CD16bタンパク質を用いてアッセイ条件を最適化してください。
• 交差反応性はヒトに限定されます。マウスまたはラットのCD16bとの反応性は予想されないため、適切なモデル系を選択するか、ヒト試料で検証してください。

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