WB、IF/ICC、IF-P、ELISA用抗CD4ウサギポリクローナル抗体 - P01730

製品主要仕様・パラメータ

生物学的背景：CD4の機能と局在

• CD4は分子量51kDaの膜内在性糖タンパク質で、T細胞表面抗原T4/Leu-3としても知られ、免疫グロブリンスーパーファミリーに分類されます。4つの細胞外Ig様ドメイン（D1～D4）、単一の膜貫通ヘリックス、SrcキナーゼLCKと相互作用する細胞質尾部を持っています。
• ヘルパーT細胞において、CD4はMHCクラスII分子の共受容体として機能します。抗原提示細胞上でT細胞受容体（TCR）とMHCクラスIIに同時に結合し、LCKを動員してTCR-CD3複合体の基質をリン酸化することで、シグナル伝達カスケードを開始し、T細胞活性化、リンホカイン産生、増殖へと導きます。
• CD4は胸腺細胞の発生とヘルパーT細胞の分化に不可欠です。また単球からマクロファージへの成熟を誘発し、自然免疫と獲得免疫における役割が裏付けられています。
• T細胞以外にも、CD4はマクロファージ、樹状細胞、NK細胞で発現されており、これらの細胞ではTCR/LCK非依存的経路を介して分化、サイトカイン発現、細胞遊走を制御しています。
• CD4はD1ドメインを介してヒト免疫不全ウイルス1型（HIV-1）の主要受容体として機能し、ウイルス侵入を促進します。またヒトヘルペスウイルス7（HHV-7）の受容体でもあります。HIV-1感染により、ウイルスタンパク質VpuによってCD4の発現が低下します。 関連文献: PMID:12089508, PMID:16331979, PMID:2214026, PMID:17346169, PMID:7909607
• 細胞内局在は主に細胞膜上であり、表面受容体としての機能と一致しています。T細胞活性化時には可溶性型が遊離されます。
• ヘルパーT細胞で高発現されますが、マクロファージ、樹状細胞、NK細胞など他の免疫細胞にも認められます。CD4の発現はヘルパーT細胞を同定するための特徴的なマーカーです。
• 翻訳後修飾として、N結合型グリコシル化、Igドメイン内のジスルフィド結合、細胞質尾部のパルミトイル化があり、これらによって膜微小ドメインへの局在やシグナル伝達が調節されている可能性があります。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 本抗体の免疫原はヒトCD4の細胞外ドメイン（アミノ酸26～200番）をカバーしており、MHCクラスIIおよびHIV-1 gp120結合部位を含んでいます。この設計により、変性ウエスタンブロットでの完全長CD4の検出に加え、免疫蛍光法やELISAでの天然立体構造の検出が可能です。
• ウエスタンブロッティングでは、還元条件下で約51kDaのバンドが予想されます。グリコシル化により見かけの分子量が大きく（55～60kDa）なることがあります。Jurkat細胞やヒトPBMC溶解物などの適切な陽性コントロールを使用し、還元剤の使用をご検討ください。
• 本抗体はマウスおよびラットCD4との交差反応性が報告されていますが、実際の実験系ごとに検証を行ってください。配列アライメントでは細胞外領域で約70%の同一性が認められます。一次抗体の滴定と十分な検証を推奨します。
• 本抗体は間接免疫蛍光法（IF/ICC）およびELISAに使用可能です。IFでは適切な固定および透過処理プロトコルを遵守し、細胞表面染色の場合は透過処理を行わないでください。対象の細胞種または組織で検証を行ってください。
• 機能研究（例：HIV-1結合の阻害）に使用する場合、ポリクローナルであるため結果にばらつきが生じる可能性があることにご留意ください。エピトープ特異的な安定した阻害にはモノクローナル抗体の使用が推奨されます。

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