Anti-CD44 (KO Validated) Rabbit Monoclonal Antibody for WB, IHC-P, IF/ICC, FC, ELISA - P16070

主要な製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：CD44の機能と局在

• CD44は、ヒアルロン酸（HA）の主要な受容体として機能するシングルパス型I膜タンパク質であり、コラーゲン、増殖因子、サイトカイン、プロテアーゼとも相互作用して、細胞が組織微小環境の変化を感知し、反応することを可能にします。 関連文献： PMID:16541107, PMID:19703720, PMID:22726066, PMID:18757307, PMID:23589287
• CD44は、リンパ球の活性化、ホーミング、再循環、ならびに造血および細菌感染に対する炎症反応を媒介します。 関連文献： PMID:7528188
• CD44の細胞内シグナル伝達には、受容体キナーゼや膜プロテアーゼとのタンパク質複合体の集合が関与し、それによりPKN2、RAC1、RHOA、およびホスホリパーゼCが活性化され、細胞骨格の再編成とカルシウム動員が促進されます。 関連文献： PMID:18757307, PMID:23589287, PMID:15123640
• このタンパク質は主に形質膜と微絨毛に局在しますが、可溶性の細胞外ドメインが細胞外空間に放出されることがあります。
• 代替スプライシングにより複数のアイソフォームが生成されます。上皮アイソフォーム10（CD44v）は癌で高発現していますが、神経芽細胞腫細胞ではその発現が抑制されています。
• タンパク質レベルでは、CD44は線維芽細胞、尿、および胎盤で検出されます。 関連文献： PMID:25326458, PMID:36213313, PMID:37453717, PMID:32337544
• このタンパク質は、糖鎖付加、リン酸化、プロテオグリカンの付加によって高度に修飾されており、ジスルフィド結合を特徴としています。また、口蹄疫ウイルスの取り込みにも関与しています。

実験のガイダンスと技術的なヒント

• 免疫原には、保存されており表面に露出しているN末端ヒアルロン酸結合ドメイン（aa 20–178）が含まれています。したがって、この抗体は、WBやIF/ICCなどのアプリケーションにおいて、複数のCD44アイソフォームやネイティブなコンフォメーションを検出する可能性があります。
• ウェスタンブロッティングの場合、予測分子量は約82 kDaですが、広範な糖鎖修飾により、拡散したバンドやラダー状のバンドパターンが生じる可能性があります。特異性を確認するために、PNGase Fやその他の脱グリコシル化酵素による前処理を検討してください。
• 免疫組織化学および免疫蛍光法では、CD44ノックダウンまたはノックアウト対照細胞株/組織を使用して特異性を検証し、染色パターンを確認してください。
• フローサイトメトリーの場合、抗体の滴定を最適化し、アイソタイプ対照を含めて、リンパ球サブセット、癌細胞、またはその他の関連集団におけるCD44発現を正確に定量してください。
• CD44細胞外ドメインの放出が起こるため、ELISAベースのアッセイのサンプル調製では、総可溶性CD44を検出するか、特定のアイソフォームを検出するかを考慮する必要があります。適切な標準およびブロッキング工程を含めてください。

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