WB、ELISA用抗CD64ウサギモノクローナル抗体 - P12314

製品の主要仕様およびパラメータ

生物学的背景：CD64の機能と局在

• CD64はFcγRIとしても知られ、免疫グロブリンG（IgG）のFc領域に対する高親和性受容体です。ヒトではFCGR1A遺伝子によってコードされ、免疫グロブリンスーパーファミリーに属します。
• この受容体はIgGに高親和性で結合することにより、体液性免疫と細胞性免疫を結び付ける重要な役割を果たし、単球およびマクロファージがIgGオプソニン化標的を認識して排除することを可能にします。
• CD64は、ウイルス感染細胞に対する抗体依存性細胞傷害（ADCC）などの強力なエフェクター機能を媒介し、抗ウイルス免疫応答に寄与します。
• このタンパク質は、3つの細胞外免疫グロブリン様ドメイン、1本の膜貫通ヘリックス、および短い細胞質テールから構成されます。使用される免疫原は細胞外領域（アミノ酸16～288）に相当し、IgG結合ドメインをカバーしています。
• CD64は単球およびマクロファージの表面に特異的に発現し、自然免疫監視および抗原提示における役割と一致しています。
• 翻訳後修飾にはN結合型糖鎖付加およびリン酸化が含まれます。観察される分子量範囲（45～75 kDa）は、糖鎖付加の不均一性を反映しています。
• 選択的スプライシングにより複数のアイソフォームが生成され、その一部は分泌型または可溶性受容体として機能する可能性があります。
• CD64は重要な自然免疫受容体であり、ADCCの引き金となることから、単球／マクロファージ活性化のバリデーション済みバイオマーカーであるとともに、がん免疫療法の治療標的です。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原は細胞外ドメイン全体（aa 16～288）をカバーする組換えタンパク質であるため、この抗体は変性エピトープだけでなくネイティブ構造も認識すると考えられます。ウエスタンブロットでは、糖鎖付加の変動により45～75 kDaの間に幅広いバンドまたは複数のバンドとして観察される可能性があるため、適切なタンパク質量および還元条件を使用してください。
• ELISAでは、抗原源として組換えFcγRIタンパク質、またはヒト単球系細胞株（例：THP-1）の細胞ライセートの使用を検討してください。アイソタイプ対照および過剰量のヒトIgGによるブロッキングを用いて、アッセイの特異性を検証してください。
• CD64の発現は単球／マクロファージに限定されているため、強固なシグナルを得るには、組織または細胞サンプルにこの細胞集団が十分に含まれていることを確認してください。混合白血球調製物では、CD14との共染色により単球の同定を確認できます。
• この抗体はヒトCD64とは交差反応すると予想されますが、他のFcγ受容体（CD32、CD16）とは交差反応しないと考えられます。より広範な反応性が必要な場合は、異なるFcγRファミリーメンバーの組換えタンパク質を用いて試験してください。
• ADCCにおける役割を考慮すると、この抗体は単球を介した細胞傷害をモニタリングする機能アッセイに有用である可能性があります。ただし、ブロッキング作用または活性化作用については実験的に決定する必要があります。

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