ウエスタンブロット（WB）、ELISA用 抗Chk1ポリクローナル抗体 - O14757

主要製品仕様・パラメータ

生物学的背景：Chk1の機能と局在

• Chk1（チェックポイントキナーゼ1）はセリン/スレオニンタンパク質キナーゼであり、タンパク質キナーゼスーパーファミリーの一員です。保存されたキナーゼドメインとATP結合ポケットを持っています。
• DNA損傷または複製されていないDNAに応答した、チェックポイントを介した細胞周期停止とDNA修復の活性化に必要であり、基質コンセンサス配列[R-X-X-S/T]を認識します。 関連文献: PMID:11535615 PMID:12399544 PMID:12446774
• Chk1はCDC25ホスファターゼ（CDC25A、CDC25B、CDC25C）をリン酸化し、14-3-3結合部位を作り出してCDC25Aのタンパク質分解を促進します。これによりCDK-サイクリン複合体が阻害され、細胞周期の進行が停止します。 関連文献: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511 PMID:19734889 PMID:20090422
• Chk1によるTP53の複数のC末端部位のリン酸化は、TP53のアセチル化と活性化を促進し、細胞周期停止を引き起こして増殖を抑制します。 関連文献: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Chk1はDNA修復に直接的な役割を持っています。RAD51のThr-309をリン酸化して相同組換えを促進し、FANCEをリン酸化してDNAクロスリンク修復を促進し、PCNAを介して複製フォークの維持を調節します。 関連文献: PMID:15665856 PMID:17296736 PMID:18451105
• Chk1はTLK1のSer-743をリン酸化してクロマチンを調節し、ASF1Aのリン酸化を防いでクロマチン集合を促進する可能性があります。またヒストンH3.1のThr11をリン酸化して遺伝子転写を調節します。 関連文献: PMID:12660173 PMID:12955071
• CHEK1の選択的スプライシングアイソフォームは、完全長Chk1の内因性リプレッサーとして作用し、直接的な相互作用と拮抗によりS期からG2/M期への移行を促進します。
• Chk1は核、染色体、細胞質、中心体に局在します。全身に普遍的に発現しており、胸腺、精巣、小腸、結腸で最も高い発現が見られます。

実験ガイダンス・技術的ヒント

• ウエスタンブロッティングでは、還元条件を使用し、胸腺や精巣などChk1の発現が知られている細胞または組織からライセートを調製してください。予測分子量は約54 kDaですが、翻訳後修飾により見かけ上のシフトが生じる可能性があります。
• 本抗体の免疫原は、キナーゼドメイン内に位置するヒトChk1のアミノ酸148～307番に対応します。この領域は標準アイソフォームで高度に保存されていますが、潜在的な代替アイソフォームに対する反応性を評価するため、適切なコントロールを用いた検証を推奨します。
• 本ウサギポリクローナル抗体はELISAおよびWBで性能が確認済みです。ELISAに使用する場合は、標準として組換えChk1タンパク質またはその断片の使用を検討し、ご使用のアッセイフォーマットに合わせて抗体希釈率とブロッキング条件を最適化してください。
• ポリクローナル抗体の性質上、ロット間でばらつきが生じる可能性があります。実験系での性能検証を行い、適切な陽性コントロールと陰性コントロールを含めることを推奨します。

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