ウエスタンブロット、IF/ICC、ELISA用 抗Cleaved PARP (Asp214) モノクローナル抗体 - P09874

製品の主要仕様とパラメータ

生物学的背景：PARP1の機能と局在

• PARP1は核内ポリADPリボシルトランスフェラーゼであり、基質タンパク質のポリADPリボシル化を仲介し、DNA修復、クロマチンリモデリング、ゲノム安定性において中心的な役割を果たす (PubMed:17177976, PubMed:18055453, PubMed:18172500)。 関連文献: PMID:17177976 PMID:18055453 PMID:18172500
• セリン、グルタミン酸、チロシン結合型ADPリボシル化を触媒し、残基特異性は補因子HPF1およびNMNAT1によって決定される (PubMed:28190768, PubMed:32028527, PubMed:29954836)。 関連文献: PMID:28190768 PMID:32028527 PMID:29954836
• DNA修復において、PARP1は鎖切断を感知し、修復因子をリクルートし、塩基除去修復および二本鎖切断修復を促進するためにクロマチンリラクゼーションを促進する (PubMed:26344098, PubMed:30356214, PubMed:19344625)。 関連文献: PMID:26344098 PMID:30356214 PMID:19344625
• アポトーシス中、PARP1はcaspase-3および-7によってAsp214で切断され、大きな触媒フラグメント（〜89 kDa）を生成する。このフラグメントは細胞質へ移行し、ポリADPリボースキャリアとして機能し、AIFM1を介したアポトーシスを引き起こす (PubMed:33168626)。 関連文献: PMID:33168626
• 通常条件下では主に核および核小体に局在する。切断後、触媒フラグメントは細胞質へ再配置される。
• PARP1は、アセチル化、ADPリボシル化（自己修飾）、リン酸化、ユビキチン化を含む広範な翻訳後修飾を受け、その活性と相互作用を調節する。
• DNA修復を超えて、PARP1は転写調節、複製フォーク進行、脂肪形成、自然免疫において、タンパク質活性とクロマチン構造を調節することにより機能する (PubMed:15607977, PubMed:22464733, PubMed:35460603)。 関連文献: PMID:15607977 PMID:22464733 PMID:35460603

実験ガイダンスと技術的ヒント

• この抗体はAsp214のネオエピトープを標的とする。したがって、フルレングスのPARPではなく、切断されたPARPフラグメントを特異的に検出する。ウエスタンブロットでは、細胞をアポトーシス誘導剤（例：スタウロスポリンまたはエトポシド）で処理し、〜89 kDaフラグメントを濃縮する。
• 免疫蛍光/ICCでは、切断フラグメントの細胞質局在を観察するために、アポトーシス誘導後の固定を検討する。適切な対照を用いて、実験系での染色特異性を検証すること。
• ELISA適合性が報告されている。アッセイを設計する際は、組換え切断PARPフラグメントまたはペプチドを標準品として使用し、コーティングおよび検出条件を最適化することを考慮すること。

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