Anti-CLOCK Rabbit Polyclonal Antibody for WB, ELISA - O15516

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：CLOCKの機能と局在

• CLOCK（Circadian Locomotor Output Cycles Protein Kaput、別名bHLHe8）は、遺伝子発現、代謝、および行動における約24時間のリズムを駆動する分子概日時計の中核成分です（UniProt O15516）。
• 転写/翻訳フィードバックループのポジティブリムブとして、CLOCKはBMAL1（またはBMAL2）とヘテロ二量体を形成し、コア時計遺伝子（PER1/2/3、CRY1/2）および時計制御遺伝子のプロモーター内のE-boxエレメント（5'-CACGTG-3'）に結合して、転写を活性化します。
• CLOCK-BMAL1ヘテロ二量体は5'-CACGTGA-3'モチーフを優先的に認識します。ここでCLOCKは5'-CAC-3'ハーフサイトに、BMAL1は5'-GTGA-3'ハーフサイトに結合します。非正規モチーフである5'-AACGTGA-3'および5'-CATGTGA-3'も認識されます。 関連参考文献： PMID:23229515
• CLOCKは固有のヒストンアセチルtransferase活性を持ち、ヒストン（H3、H4など）やBMAL1自体を含む非ヒストンタンパク質をアセチル化することで、概日クロマチンリモデリングを可能にします。この活性は、リズム生成において転写と同様に重要です。
• 概日的にアルギニノコハク酸シンターゼ1（ASS1）をアセチル化し、酵素活性の阻害とアルギニン生合成および尿素生成のリズム制御につながります。これにより、時計と代謝が結びついています。 関連参考文献： PMID:28985504
• CLOCKは、受容体のヒンジ領域にある複数のリジン残基をアセチル化することにより、糖質コルチコイド受容体NR3C1/GRの転写活性を抑制し、糖質コルチコイド応答エレメントとの結合を減少させます。 関連参考文献： PMID:21980503
• 細胞内では、CLOCKは主に核内にありますが、細胞質やサイトゾルでも検出されます。組織広く発現しており、精巣と骨格筋で最もレベルが高く、脳の視交叉上核（SCN）である中枢時計に高度に濃縮されています。
• リン酸化、アセチル化、ユビキチン化を含む翻訳後修飾は、CLOCKの安定性と活性を微調整し、概日リズムの正確な振動制御に寄与しています。

実験のガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原はヒトCLOCKのアミノ酸450-600に相当し、この領域はアセチルtransferaseドメインの認識を確実にし、全長および潜在的なアイソフォームの検出に役立つ可能性があります。関連する種および組織での反応性を確認することを検討してください。
• ウェスタンブロットの場合、CLOCKの予測分子量は95 kDaですが、翻訳後修飾（リン酸化、アセチル化など）により観察されるバンドがシフトする可能性があります。ウサギポリクローナル抗体用に最適化された適切なブロッキングおよび検出バッファーを使用してください。
• ELISAの場合、抗体の捕捉を最大化するために、組換えタンパク質またはペプチドのコーティングが免疫原領域と一致していることを確認してください。アッセイ系で最適な作業濃度を決定するために、抗体を滴定してください。
• ヒト、マウス、ラットでの交差反応性が報告されています。ポジティブコントロールとネガティブコントロールを使用して、選択したモデル生物で検証してください。CLOCKの発現は概日的であるため、内生レベルを検査する際は採取時刻を考慮してください。

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