WB用抗COX5Bウサギモノクローナル抗体 - P10606

製品の主要仕様・パラメータ

生物学的背景：COX5Bの機能と局在

• COX5B（チトクロムcオキシダーゼサブユニット5B）は、電子伝達系の最終酵素であるミトコンドリア複合体IV（チトクロムcオキシダーゼ）の核コードサブユニットです。
• 複数のサブユニットからなるチトクロムcオキシダーゼ複合体の構成要素であり、分子状酸素の水への還元反応を触媒し、この反応と共役させてミトコンドリア内膜を介したプロトンポンピングを行います。
• COX5Bタンパク質はミトコンドリア移行ペプチドと共に合成され、ミトコンドリアへのインポート後に切断されて、成熟サブユニットとなり内膜に組み込まれます。
• 亜細胞局在はミトコンドリア内膜に限定されており、複合体IVの構造的および機能的完全性に寄与しています。
• 翻訳後修飾としてアセチル化が存在し、結晶構造中に亜鉛イオンが存在することから、成熟タンパク質は亜鉛結合部位を持っていることがわかっています。
• 成熟ヒトCOX5Bの理論分子量は約13.7 kDaであり、SDS-PAGEで観察される13 kDaのバンドと一致しています。
• 呼吸鎖のコアサブユニットとして、COX5Bは効率的な酸化的リン酸化とATP産生に必須であり、その発現はミトコンドリア量と活性のマーカーとしてよく用いられます。

実験ガイダンスと技術的なヒント

• 免疫原はヒトCOX5Bのアミノ酸29～129番をカバーしており、これはミトコンドリア標的ペプチドを欠く成熟プロセシング済みタンパク質に対応するため、内在性のプロセシングされた型を認識する抗体が生成される可能性が高いです。
• ウェスタンブロッティングでは、ヒト、マウス、ラットのミトコンドリアリッチな組織（心臓、骨格筋、肝臓など）の溶解液で13 kDa付近にバンドが予測されます。最適な検出のために、ミトコンドリア分画を濃縮したサンプルの使用を推奨します。
• 免疫組織化学（IHC-P）および免疫蛍光（IF/ICC）では、ミトコンドリア局在と一致する斑点状の細胞質染色が見られます。検証のために、ミトコンドリアマーカーで対比染色を行うことを推奨します。
• 免疫沈降（IP）実験では、本抗体が他の複合体IVサブユニットを共沈殿させる可能性があります。天然の複合体の完全性を保つために、穏和な界面活性剤の使用をご検討ください。
• ELISA反応性を用いて、細胞または組織溶解液中のCOX5Bを定量的に検出することができますが、既知の標準物質を用いて性能を検証する必要があります。
• マウスおよびラットとの交差反応性は確認済みですが、配列に変異が生じる可能性があるため、常にご自身の実験系で種特異的な反応性を確認してください。

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