WB、ELISA用 抗DNAポリメラーゼγ モノクローナル抗体 - P54098

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：DNAポリメラーゼγの機能と局在

• DNAポリメラーゼサブユニットγ-1 (POLG)はミトコンドリアDNAポリメラーゼの触媒コアであり、ミトコンドリアゲノム全体の複製を担う。一本鎖DNA鋳型とRNAプライマーを用いて重鎖と軽鎖の両方を合成し、TWNKヘリカーゼおよびSSBP1と共に高度にプロセッシブなレプリソームとして機能する。 関連文献： PMID:11477093, PMID:11897778, PMID:15917273
• POLGは3'→5'エキソヌクレアーゼ校正活性を有し、塩基置換、一塩基付加、欠失を修正することで、mtDNA複製中の高忠実性を保証する。誤った挿入が生じると、酵素は核分解編集モードに移行して誤ったヌクレオチドを除去する。 関連文献： PMID:10827171, PMID:11477094, PMID:11504725
• mtDNA合成完了後、POLGはニック部位での3'→5'エキソヌクレアーゼ分解を媒介して適切なライゲーションを促進し、また5'-デオキシリボースリン酸 (dRP) リアーゼ活性も示し、ミトコンドリア塩基除去修復経路への関与を可能にする。 関連文献： PMID:9770471, PMID:11477093, PMID:15167897
• POLG遺伝子の変異は、進行性外眼筋麻痺 (PEO)、神経障害、てんかん、リー症候群を含む一連のミトコンドリア疾患と関連している。これは、ミトコンドリアDNA枯渇および欠失症候群に関連する主要なミトコンドリア疾患遺伝子である。
• 本タンパク質はミトコンドリアマトリックスに局在し、ミトコンドリアヌクレオイドの構成要素であり、mtDNAと結合して複製と維持を促進する。
• POLGはDNAポリメラーゼtype-Aファミリーに属する大型の多機能酵素 (約140 kDa) である。ポリメラーゼおよびエキソヌクレアーゼ活性にはマグネシウムイオンを必要とする。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• この抗体の作製に用いた免疫原は、ヒトPOLGのC末端領域 (アミノ酸1140–1239) 内のペプチドに対応する。このエピトープは触媒ドメインの外側に位置し、野生型および一部の変異型の両方を認識する可能性がある。ただし、各実験系において、天然状態および変性条件下でのエピトープアクセシビリティを確認すること。
• ウェスタンブロットでは、予測分子量は140 kDaである。高分子量タンパク質に適したゲル濃度および転写条件を使用し、ヒトまたはマウス細胞のミトコンドリアライセートなどの陽性対照を含めること。
• マウスPOLGとの交差反応性は確認されており、本抗体はミトコンドリア疾患のマウスモデル研究に適している。配列保存性が高いため、他の種との交差反応性も可能性はあるが、経験的に検証すべきである。
• ELISAでは、本抗体は捕捉または検出試薬として使用できる。最適な作業濃度を決定するために抗体を滴定し、コーティング抗原にC末端エピトープまたは免疫原領域を含む組換えPOLGフラグメントが含まれていることを確認すること。
• POLG発現は遍在的であるが、エネルギー需要の高い組織で豊富であることに注意。肝臓、筋肉、脳のミトコンドリア調製物などの関連サンプル系における検出感度を検証することを考慮すること。

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