ウエスタンブロットおよびELISA用 抗HIF1AN/FIH1 ウサギポリクローナル抗体 - Q9NWT6

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景: HIF1AN/FIH1の機能と局在

• HIF1AN (低酸素誘導性因子1-α阻害因子) は、FIH-1 (HIF-1阻害因子) とも呼ばれ、低酸素応答を調節するアスパラギン水酸化酵素です。
• 常酸素条件下では、C末端転写活性化ドメインのAsn-803でHIF-1αを水酸化し、p300/CBP共役因子のリクルートを阻害することで、低酸素誘導性遺伝子転写を抑制します。
• 直接的な酸素センサーとして機能し、その水酸化酵素活性には分子状酸素、鉄、2-オキソグルタル酸が必要であり、細胞内酸素濃度とHIF-1αの安定性および活性を結びつけます。
• HIF-1αを超えて、HIF1ANはNFKB1、NOTCH1、ASB4、TNKS2など多様なタンパク質のアンキリンリピートドメイン (ARD) 内のアスパラギン、アスパラギン酸、ヒスチジン残基を水酸化し、低酸素以外のシグナル伝達経路を調節します。
• NOTCH1を水酸化することでNotchシグナル伝達を負に制御し、筋分化を促進します。逆に、ASB4の水酸化は血管分化を正に促進します。
• 核内および細胞質に分布し、核周辺に蓄積する傾向があり、転写調節および細胞質タンパク質相互作用における役割を反映しています。
• ジオキシゲナーゼおよび鉄依存性オキシドレダクターゼに分類され、その活性部位には触媒に必須の単核鉄中心が含まれています。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原は、触媒JmjCドメインを含む、ほぼ全長のHIF1ANタンパク質 (残基1–349) をカバーしています。この設計により、複数のエピトープを認識する抗体が産生され、変性および非変性条件下でのアッセイにおける検出を助けることが期待されます。
• ウエスタンブロットでは、約40–41 kDa付近にバンドが予想されます。陽性対照として常酸素培養細胞ライセート (例: HeLa, HEK293) を、またHIF-1α水酸化依存性の影響を評価するために低酸素処理サンプルを含めると有益な場合があります。
• ELISAを行う場合は、組換えHIF1ANまたはHIF-1αペプチドを固相化することを検討してください。異なるエピトープに特異的な捕捉抗体と組み合わせたサンドイッチELISAは、特異性を高める可能性があります。
• マウスHIF1ANとの交差反応性が予測されていますが、適切な組織または細胞抽出物を用いて性能を確認する必要があります。
• 最適な抗体希釈率およびアッセイ条件は、各実験系ごとに経験的に決定する必要があります。

CamelBio: ワンストップ調達の架け橋

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