WB、IF-P、IHC-P、ELISA用 抗ヒトHLA-DPB1ウサギモノクローナル抗体 - P04440

主要製品仕様とパラメータ

生物学的背景：HLA-DPB1の機能と局在

• HLA-DPB1は、HLAクラスII組織適合性抗原のβ鎖であり、CD4+ T細胞に外来性ペプチド抗原を提示することで適応免疫応答において中心的な役割を果たすヘテロ二量体型膜貫通型糖タンパク質です。通常10〜30残基の長さの処理されたペプチドは、エンドソーム/リソソーム系内でMHCクラスII分子にロードされます。
• 機能的なMHCクラスII分子は、3つのα-βヘテロ二量体が不変鎖（CD74）三量体と会合したヘテロ九量体として組み立てられます。エンドソーム経路に入ると、CD74はカテプシンS（CTSS）やカテプシンL（CTSL）などのプロテアーゼによって徐々に切断され、結合溝に残存するCLIPペプチドが、ペプチドエディターHLA-DMの助けを借りて高親和性の抗原性ペプチドと交換されます。
• 抗原ロードプロセスは、特殊化された後期エンドソーム/リソソーム区画で起こり、酸性の微小環境が、内在化された抗原のプロテオリシスとペプチド交換反応の両方を促進します。B細胞では、このプロセスはHLA-DMの活性を調節するHLA-DOによってさらに調節されます。
• HLA-DPB1はMHCクラスIIβ鎖遺伝子ファミリーの一員であり、染色体6上のHLA-DP遺伝子座にマッピングされます。別名にはDPB1、HLA-DP、HLA-DPB、HLA-DP1Bが含まれます。
• 細胞内局在に関して、HLA-DPB1は小胞体とゴルジ装置を通過して細胞表面に到達します。また、エンドソーム、リソソーム、トランスゴルジネットワークでも検出され、ペプチドロードと表面発現における動的な細胞内輸送を反映しています。
• このタンパク質は、シグナルペプチド、単一の膜貫通ヘリックス、ジスルフィド結合を持つ膜貫通型糖タンパク質として分類されます。N結合型グリコシル化を受け、免疫グロブリンスーパーファミリーに属します。
• HLA-DPB1を含むMHCクラスII分子は、樹状細胞、B細胞、マクロファージなどの専門的な抗原提示細胞で恒常的に発現していますが、腸管上皮細胞を含む他の細胞種でも誘導され、粘膜免疫に参加します。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• この抗体の作製に使用された免疫原は、ヒトHLA-DPB1の残基1〜100にまたがる合成ペプチドであり、N末端細胞外領域に対応します。この領域には、ペプチド結合とMHC IIヘテロ二量体形成に関与するシグナルペプチドとβ1ドメインの一部が含まれます。特定のアプリケーションにおいて、天然状態と変性状態でのエピトープのアクセシビリティを検証することを検討してください。
• ウェスタンブロッティングでは、還元条件下で約29 kDaに移動するバンドが予想されます。グリコシル化やタンパク質複合体形成により、より高い分子量の種も観察される可能性があります。複雑なライセートにおける非特異的結合を最小限に抑えるために、ブロッキングと洗浄条件を最適化してください。
• 免疫蛍光（IF-P）および免疫組織化学（IHC-P）では、この抗体は膜関連抗原を標的とします。ホルマリン固定パラフィン包埋切片では、熱誘導クエン酸緩衝液（pH 6.0）を用いた抗原賦活化がしばしば有益です。HLA-DPB1が高発現している扁桃やリンパ節などの適切なアイソタイプコントロールおよび組織特異的陽性コントロールを含めてください。
• この抗体はマウスおよびラットとの交差反応性を示し、保存されたエピトープの認識を示唆しています。げっ歯類のサンプルを使用する場合は、MHCクラスIIの細胞種分布と発現レベルの潜在的な違いを考慮に入れてください。モデルシステムでの適合性を確認するために予備実験をお勧めします。
• ELISAアプリケーションでは、この抗体は、組換えまたは天然のHLA-DPB1に対するキャプチャー試薬または検出試薬として使用できます。抗HLA-DPα鎖抗体とのペアリングは、完全なヘテロ二量体の検出を確実にするのに役立つ可能性があります。可溶性HLAまたは交差反応性MHCクラスI分子からの干渉を排除するために、関連するサンプルマトリックスでアッセイを検証してください。

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