フローサイトメトリー用 抗ヒトCD59モノクローナル抗体 - P13987

製品の主要仕様およびパラメータ

生物学的背景：CD59の機能と局在

• CD59は、プロテクチン、MAC阻害タンパク質（MAC-IP）、20 kDa相同制限因子（HRF-20）、1F5抗原としても知られており、補体膜侵襲複合体（MAC）の重要な阻害因子として機能するGPIアンカー型細胞表面糖タンパク質です。
• CD59は、形成中のMACのC8構成成分（C8AおよびC8B）に結合し、分子間βシートを形成します。これにより複数のC9分子の取り込みが阻止され、浸透圧溶解性の細孔形成が阻害されることで、補体介在性溶解からヒト細胞を保護します（PubMed:11882685, PubMed:1698710, PubMed:2475111, PubMed:36797260）。 関連文献： PMID:11882685、PMID:1698710、PMID:2475111、PMID:36797260
• 尿中に存在する可溶性型CD59は補体結合活性を保持していますが、細胞膜上でのMAC形成を阻害する能力は大幅に低下しています。
• このタンパク質はGPIアンカーを介して細胞膜に局在し、分泌型も検出されています。
• CD59は選択的スプライシングおよび、ジスルフィド結合形成、糖化、N結合型糖鎖付加などの翻訳後修飾を受けます。CD59の変異は遺伝性溶血性貧血と関連しています。
• CD59の予測分子量は14,177 Daであり、SDS-PAGEにおける約14～18 kDaでの観察上の移動度と一致します。

実験手順および技術上のヒント

• 免疫原にはヒトCD59の細胞外ドメイン（アミノ酸26～101）が含まれており、MAC結合に関与する主要な機能部位を含みます。この設計により、天然の適切に折りたたまれた立体構造を認識しやすくなる可能性があります。
• フローサイトメトリーでは、細胞表面のGPIアンカー型CD59を維持するため、生細胞・未固定細胞の使用を検討してください。非特異的結合を最小限に抑えるため、Fc受容体のブロッキングが推奨されます。
• 最適な希釈率を決定するため、各実験条件下で抗体を滴定してください。蛍光色素の安定性を維持するため、標識体を遮光し、凍結融解の反復を避けてください。
• CD59陽性細胞（例：白血球）およびCD59ノックアウトまたは欠損対照を用いて特異性を検証してください。抗GPIアンカーマーカーによる補完的検出により、膜局在を確認できます。

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