WB、IF/ICC、ELISA用Anti-IKKβ Rabbit pAb - O14920

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：IKKβの機能と局在

• IKKβは、プロ炎症性サイトカイン、パターン認識受容体、および遺伝毒性ストレスの下流にあるNF-κBシグナル伝達の活性化に不可欠な、正統IKK複合体の重要な触媒サブユニットとして機能するセリン/スレオニンプロテインキナーゼです。 関連参考文献： PMID:9346484
• 保存されたセリン残基にあるκB（IκB）阻害タンパク質をリン酸化し、K48結合ポリユビキチン化とプロテアソーム分解を誘発します。これにより、NF-κBダイマー（例：p65/p50）が解放され、核内移行および免疫、生存、炎症遺伝子の転写が行われます。 関連参考文献： PMID:20434986, PMID:20797629, PMID:21138416
• IκB基質以外にも、IKKβはNEMO/IKBKG、RELA、およびIKK関連キナーゼであるTBK1とIKBKEを含む複数のシグナル伝達パートナーをリン酸化し、NF-κBネットワーク内で順方向の活性化と負の調節フィードバックの両方を提供します。 関連参考文献： PMID:11297557, PMID:14673179, PMID:20410276
• このキナーゼはまた、非正統基質であるFOXO3（このアポトーシス促進転写因子のTNF誘導性不活性化を媒介する）やSTAT1（Thr-749でリン酸化され、ARID5A媒介性のIL-6安定化およびIL-12B活性化を促進する）も標的とし、それによってNF-κBをアポトーシスおよび自然免疫経路と統合します。 関連参考文献： PMID:15084260, PMID:32209697, PMID:38621137
• 細胞分画および免疫蛍光研究により、IKKβは主に細胞質に局在することが示されていますが、シグナル依存的に核へ移行し、特定の刺激に応じて膜ラフトに動員されます。
• 組織発現プロファイリングにより、心臓、胎盤、骨格筋、腎臓、膵臓、脾臓、胸腺、前立腺、精巣、末梢血においてIKKβレベルが高いことが明らかになっており、普遍的な炎症制御におけるその役割と一致しています。
• アセチル化、ヒドロキシル化、S-ニトロソシル化、およびイソペプチド（ユビキチン様）結合を含む翻訳後修飾は、IKKβの安定性、活性、および調節パートナーとの相互作用を微調整します。
• 臨床的には、IKBKBの機能喪失変異は、重症複合免疫不全症（SCID）およびその他の免疫調節不全症候群と関連しており、免疫恒常性におけるその冗長性のない役割を強調しています。

実験的ガイダンスと技術的なヒント

• 免疫原は、ヒトIKKβのC末端半分にある残基400–669にまたがっています。この領域はキナーゼドメインから離れて位置しており、複数のスプライスバリアントまたはプロテアーゼ分解断片を検出する可能性があり、ウェスタンブロットで観察される報告された29–87 kDaの範囲と一致しています。全長種を保持するために、サンプル調製中にプロテアーゼ阻害カクテルを使用することを検討してください。
• ウェスタンブロットでは、関連する細胞系統でsiRNAノックダウンまたはCRISPR-Cas9ノックアウトによって特異性を検証し、予測される全長分子量（約87 kDa）と比較してください。IF/ICCについては、細胞質および誘導性核染色の両方を予想してください。核マーカーで二重染色し、適切なネガティブコントロールで検証してください。
• ELISAアプリケーションでは、組換えIKKβタンパク質またはペプチド免疫原をポジティブキャプチャーコントロールとして使用し、標準的な間接法プロトコルを用いて抗体を滴定して、S/N比を最適化してください。

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