WB、IF/ICC、FC、ELISA用抗KIR2DL2/KIR2DL3モノクローナル抗体 - P43628

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：KIR2DL2/KIR2DL3の機能と局在

• KIR2DL3（キラー細胞免疫グロブリン様受容体2DL3、別名CD158b、p58 NK受容体、NKAT2）は、KIRファミリーに属するI型膜貫通糖タンパク質です。ナチュラルキラー（NK）細胞上で、HLA-Cw1、Cw3、Cw7を含む特定のHLA-Cアロタイプに対する抑制性受容体として機能します。
• この受容体は2つの細胞外免疫グロブリン様C2型ドメイン、1本の膜貫通ヘリックス、およびホスファターゼをリクルートして活性化シグナルを遮断する免疫受容体チロシンベース抑制モチーフ（ITIM）を持つ細胞質尾部を含んでいます。
• KIR2DL3の発現は主にNK細胞に限定されており、NK細胞上で自己寛容を介し、標的細胞のMHCクラスI発現をモニタリングすることで「欠失自己」の監視を行っています。
• リガンドによるKIR2DL3の結合はNK細胞媒介性細胞傷害を抑制し、健康な細胞の溶解を防ぐ一方で、HLA-Cの発現が低下した細胞の殺傷を可能にします。
• 細胞外ドメインはN結合型グリコシル化およびジスルフィド結合形成を受けるため、複数の分子量バンドが観察されます（非グリコシル化で約27 kDa、グリコシル化で約37～38 kDa）。
• 別の遺伝子にコードされるKIR2DL2は、KIR2DL3と約96%のアミノ酸同一性を共有し、同様のHLA-C特異性を示します。本抗体の免疫原（KIR2DL3の22～245アミノ酸）は両受容体間で保存された領域にまたがっているため、交差検出が可能です。
• KIR2DL3転写産物の選択的スプライシングにより、リガンド結合やシグナル伝達特性が変化したバリアントが生じることがありますが、完全長アイソフォームが主要な機能型です。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• ウエスタンブロッティングでは、約27 kDa（非グリコシル化）および37～38 kDa（グリコシル化型）のバンドが予想されます。還元条件を使用し、KIR陽性NK細胞株（NK92、YTSなど）の全ライセートを陽性対照としてロードしてください。バンドパターンを単純化するため、PNGase Fによる脱グリコシル化を検討してください。
• 免疫原が細胞外ドメインをカバーしているため、本抗体は天然の表面受容体を認識します。フローサイトメトリーおよび免疫蛍光法では、表面染色に透過処理は必要ありません。ヒトPBMCまたは単離NK細胞での特異性を確保するため、抗体の滴定を行い、アイソタイプ対照を含めてください。
• ELISA用途では、本モノクローナル抗体は捕捉試薬または検出試薬として使用できます。サンドイッチイムノアッセイを構築する場合は、別のエピトープに結合するバインダーとペアにしてください。組換えKIR2DL3タンパク質または細胞ライセートで検証を行ってください。
• 配列相同性が高いため、各受容体を個別に発現する細胞株（293Tトランスフェクタントなど）で試験を行い、KIR2DL2に対する交差反応性を確認してください。
• KIRの多型により、ドナー間で染色パターンが異なる場合があります。用途および細胞種ごとに抗体濃度の最適化を行ってください。

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