Anti-KLKB1 Rabbit Polyclonal Antibody for WB, IHC-P, ELISA - P03952

製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：KLKB1の機能と局在

• KLKB1は血漿プレカリクレイン（血漿カリクレインの酵素前体）をコードしており、不活性な前駆体として血液中を循環するセリンプロテアーゼです。
• 活性化されると、血漿カリクレインは、負に帯電した表面に結合した後、凝固因子XII（FXII）を相互に活性化することにより、表面依存性の血液凝固活性化に関与します。
• 高分子量キニノーゲン（HMWK）から血管作動性ペプチドであるブラジキニンを遊離させ、接触活性化系と炎症および血管透過性を結びつけています。
• 血漿カリクレインは、プロレニンを活性型レニンに変換することにより、レニン-アンジオテンシン系にも寄与する可能性があります。
• 細胞内局在は細胞外に限定されており、このタンパク質は血漿中へ分泌され、通常そこに存在します。
• このタンパク質は、シグナルペプチド、タンパク質間相互作用のための複数のアップルドメイン、およびトリプシン様セリンプロテアーゼドメインを含んでおり、N-結合型糖鎖修飾を受けており、ジスルフィド結合によって安定化されています。
• KLKB1の遺伝的変異は、プレカリクレイン欠乏症（フレッチャー特性）と関連しており、活性化部分トロンボプラスチン時間（APTT）の延長を伴うまれな疾患ですが、通常、出血傾向は見られません。

実験のガイダンスと技術的なヒント

• 免疫原は、HMWKおよび負に帯電した表面への結合を担う4つのアップルドメインを含む重鎖のアミノ酸20～300をカバーしています。この領域はヒト、マウス、ラットの間で高度に保存されており、観察された交差反応性を裏付けています。
• ウェスタンブロットでは、71 kDa付近（プレカリクレイン）または約85 kDa（糖鎖修飾された全長）のバンドが検出される場合があります。ジスルフィド結合で連結した鎖を分離するために、DTT/TCEPによる還元が推奨されます。
• 免疫組織化学（IHC-P）では、クエン酸バッファー（pH 6.0）による抗原賦活化と、ウサギ一次抗体に感度の高い検出システムの使用を検討してください。特異性を確認するために、免疫前血清またはブロッキングペプチドをコントロールとして使用することをお勧めします。
• ELISAでは、本抗体をキャプチャーまたは検出試薬として使用できますが、異なるエピトープに対するモノクローナル抗体と組み合わせることで、感度と特異性が向上する場合があります。
• 血漿カリクレインは血液中に豊富に含まれているため、非特異的結合が観察される場合は、固定化されたマウス/ラット血清タンパク質に対してポリクローナル抗体を事前吸着させることで、齧歯類組織でのアプリケーションにおけるバックグラウンドを低減できます。
• 特定のサンプルタイプ（血漿、血清、組織ライセート）での性能を検証するために、ポジティブコントロール（精製血漿カリクレインまたは活性化血漿など）およびネガティブコントロール（KLKB1除去血漿、または利用可能な場合はノックアウト細胞株）を含めてください。

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