WB、IF-P、IHC-P、ELISA用抗メソテリンポリクローナル抗体 - Q13421

製品の主要仕様およびパラメータ

生物学的背景：メソテリンの機能と局在

• メソテリンは、CAK1抗原またはプレプロメガカリオサイト増強因子としても知られ、MSLN遺伝子にコードされ、選択的スプライシングによって複数のアイソフォームとして存在します。
• このタンパク質は前駆体として合成され、膜に固定されたGPI結合型成熟メソテリンと、分泌型メガカリオサイト増強因子（MPF）に切断されます。
• 膜固定型メソテリンは細胞接着に関与し、中皮細胞と他の細胞種との相互作用を媒介する可能性があると考えられています。
• 分泌される断片であるMPFは、当初、in vitroでメガカリオサイトコロニー形成を促進する能力によって同定されました。
• 細胞内では、メソテリンはGPIアンカーを介して細胞膜に局在するとともに、生合成中はゴルジ装置にも局在します。MPF断片は細胞外へ分泌されます。
• 組織での発現は肺および中皮細胞で最も顕著で、心臓、胎盤、腎臓では低レベルです。タンパク質レベルでは、中皮腫、卵巣がん、一部の扁平上皮がんで高度に過剰発現しています。
• 主な翻訳後修飾には、N結合型糖鎖付加、ジスルフィド結合形成、リン酸化、GPIアンカー付加が含まれ、これらすべてが構造および機能特性に寄与しています。
• UniProtのキーワードでは、細胞接着、膜との結合、およびがんにおける異常発現を介した疾患との関連性が強調されています。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原はヒトメソテリンのアミノ酸296～606を対象として設計されており、細胞外ドメインをカバーしています。この領域はMPF断片と部分的に共有されている可能性があり、両方の形態を検出できる可能性があります。
• ウェスタンブロッティングでは、全長前駆体または膜固定型に相当する約69 kDaのバンドが予想されます。約30～40 kDaの追加バンドは、遊離したMPF断片を示している可能性があります。
• IHC-Pを実施する際は、pH 6または9での抗原賦活化を検討し、メソテリンを高発現することが知られている中皮または卵巣がんの組織切片を用いて染色特異性を検証してください。
• IF-Pでは、パラホルムアルデヒドで細胞を固定し、適切に透過処理してください。細胞膜およびゴルジ装置におけるシグナル局在を確認してください。
• 既知の陽性および陰性細胞株を用いて、ヒト、マウス、ラット試料に対する反応性を検証してください。陽性対照には、OVCAR-3（ヒト卵巣がん）またはAB22（マウス中皮腫）などを使用できます。
• ELISA用途では、組換えメソテリン／MPFタンパク質を標準物質として、捕捉形式および検出形式の両方を試験すると有用な場合があります。
• この抗体は膜結合型と可溶型の両方を検出する可能性があるため、両者を区別するには試料調製（細胞溶解液と培養上清）を考慮してください。

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