WB、IF/ICC、IP、ELISA用 抗MST1/STK4 ウサギポリクローナル抗体 - Q13043

中核製品仕様とパラメータ

生物学的背景: MST1/STK4の機能と局在

• セリン/スレオニンプロテインキナーゼ4 (STK4)、別名MST1、KRS2、YSK3は、STK4遺伝子によってコードされるストレス活性化型のプロアポトーシスキナーゼです。これは、増殖を抑制しアポトーシスを促進することで臓器サイズを制御し腫瘍を抑制するHippoシグナル伝達経路の主要構成要素です。
• MST1/STK4は、その調節タンパク質SAV1と共にHippoキナーゼカスケードの中核を形成し、MOB1と複合体を形成するLATS1/2をリン酸化して活性化し、それが続いてがん原性タンパク質YAP1およびTAZをリン酸化して不活性化します。
• アポトーシス中のカスパーゼ切断により、活性化キナーゼ断片は核に移行し、そこでヒストンH2BのSer-14 (H2BS14ph) をリン酸化し、直接的にクロマチン凝縮とDNA断片化を引き起こします。
• MST1/STK4は、FOXO3（核移行と細胞死を促進）、FOXO1（PMAIP1転写を調節）、SIRT1（p53脱アセチル化を阻害してp53依存性アポトーシスを増強）、PKB/AKT1（阻害剤として作用）を含む複数の下流標的をリン酸化します。
• また、アンドロゲン受容体 (AR) のSer-650をリン酸化し、AR-クロマチン複合体形成を拮抗し、AKT1シグナル伝達と交差することでAR活性を抑制します。
• 細胞内局在は主に細胞質ですが、切断された活性化キナーゼはアポトーシス条件下で核に入り、そのプロアポトーシス機能を発揮します。
• 遍在的に発現していますが、MST1/STK4タンパク質レベルは、前立腺がんにおいて正常状態から悪性状態へと移行する際に顕著に増加しており、がん進行における潜在的な役割を示唆しています。
• 主要な構造的特徴には、N末端のセリン/スレオニンキナーゼドメインとコイルドコイルモチーフを持つC末端調節ドメインが含まれます。翻訳後修飾にはアセチル化とリン酸化が含まれ、全長タンパク質の予測分子量は約56 kDaです。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原は、ヒトMST1/STK4のC末端調節領域内のアミノ酸303-487に対応しており、N末端キナーゼドメインを避けています。したがって、得られるウサギポリクローナル抗体は、この領域で高い相同性を持つ種間で保存されたエピトープを認識する可能性があります。
• ウェスタンブロット (WB) では、56 kDa付近のバンドが期待されます。ただし、アポトーシス中のカスパーゼ切断により、アポトーシスサンプルではより小さな約36 kDaの活性化断片も検出される可能性があります。適切な対照（例：スタウロスポリン処理細胞）の使用を検討してください。
• 免疫蛍光/免疫細胞化学 (IF/ICC) では、細胞のアポトーシス状態に応じて、細胞質および核の局在の両方が観察される可能性があります。この標的に対しては、固定と透過処理の方法を最適化する必要があります。
• 免疫沈降 (IP) では、この抗体がポリクローナル調製物であり、SAV1やMOB1などの結合パートナーを共沈降させる可能性があることに注意してください。適切な陰性対照を用いて、ご自身のアッセイ系で検証してください。
• ELISAの性能は、MST1/STK4に特異的な適切なモノクローナル捕捉抗体と対で使用する場合、コーティングまたは検出試薬としてこの抗体を使用することで向上する可能性があります。
• 交差反応性はヒト、マウス、ラットで報告されています。免疫原領域の配列アライメントはこれらの種間で高い保存性を示していますが、他の種については使用前に相同性を確認してください。

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