WB、IHC-P、ELISA用抗NEDD4ポリクローナル抗体 - P46934

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：NEDD4の機能と局在

• NEDD4（神経前駆細胞に発現し発生過程でダウンレギュレーションされるタンパク質4）は、RPF1、NEDD4-1、およびcell proliferation-inducing gene 53 proteinとしても知られています。HECT型E3ユビキチンリガーゼであり、タンパク質分解、受容体シグナル伝達、オートファジーにおいて重要な役割を果たします。
• E3ユビキチンリガーゼとして、NEDD4はE2酵素からユビキチンを受け取り、標的基質のリジン63にユビキチンを特異的に転移して、ポリユビキチン鎖を形成します。 関連文献： PMID:19920177、PMID:21399620、PMID:23644597
• NEDD4は、増殖因子受容体（IGF1R、FGFR1、EGFR）、シグナル伝達タンパク質（RAPGEF2、TNK2、BRAT1、DAZAP2）、および転写関連機構（POLR2A）など、広範な基質をユビキチン化し、多くの基質を細胞内取り込みならびにリソソームまたはプロテアソームによる分解へと導きます。 関連文献： PMID:21765395、PMID:11598133、PMID:20086093、PMID:25631046、PMID:11342538、PMID:19920177
• ポリユビキチン化によるPTENの安定性調節におけるNEDD4の役割については議論が続いており、直接的な関連を示唆する研究がある一方で、その関連性を疑問視する研究もあります。 関連文献： PMID:18562292、PMID:17218260
• NEDD4はUSP13をリクルートする足場として機能し、脱ユビキチン化複合体を形成します。この複合体はVPS34からLys-48結合型ユビキチン鎖を切断し、VPS34を安定化してオートファゴソーム形成を促進します。 関連文献： PMID:32101753
• ウイルス感染時、NEDD4はエボラウイルスVP40をユビキチン化し、ウイルスの出芽に寄与します。
• NEDD4は細胞質、核、および細胞膜に局在し、アセチル化やリン酸化などの翻訳後修飾を受けます。

実験上の指針および技術的ヒント

• 免疫原はヒトNEDD4の中央領域にあたるアミノ酸160～460を含むため、この抗体は複数のアイソフォームまたは機能ドメインを認識する可能性があります。使用するサンプル系でのバリデーションを推奨します。
• ウェスタンブロッティングでは、予測分子量は約149 kDaです。高分子量タンパク質を効率的に転写するため、低濃度のゲル（例：6～8%）の使用および転写時間の延長を検討してください。
• 免疫組織化学（パラフィン包埋組織）では、抗原賦活化条件の最適化が必要となる場合があります。特異性を確認するため、適切な陽性対照および陰性対照を含めてください。
• ELISAでは、ポリクローナル抗体であることにより高い結合力が得られる可能性があります。捕捉抗体および検出抗体の両方としての性能を評価し、関連する組換え標準品を用いてバリデーションしてください。

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