WB、IHC-P、IF/ICC、ELISA用 抗NRF2ポリクローナル抗体 - Q16236

中核製品仕様とパラメータ

生物学的背景：NRF2の機能と局在

• NRF2 (Nuclear factor erythroid 2-related factor 2、別名NFE2L2) は、NFE2L2遺伝子によってコードされる転写因子であり、分子量は約68 kDaです。cap 'n' collar basic-region leucine zipper (CNC-bZIP) ファミリーに属します。
• NRF2は、第2相解毒酵素を含む細胞保護遺伝子のプロモーター領域内の抗酸化応答エレメント (ARE) に結合することにより、酸化ストレスに対する細胞防御において中心的な役割を果たし、反応性求電子体を中和します。 関連参考文献: PMID:11035812, PMID:19489739, PMID:29018201
• 基礎状態では、NRF2はユビキチン化され、KEAP1-CUL3-RBX1 E3ユビキチンリガーゼ複合体によって細胞質内で急速に分解されます。酸化ストレスまたは求電子ストレスが生じると、KEAP1が阻害され、NRF2が蓄積し、核へ移行し、small Mafタンパク質とヘテロ二量体を形成して標的遺伝子の転写を活性化します。 関連参考文献: PMID:11035812, PMID:15601839, PMID:29018201, PMID:19489739, PMID:29590092
• 選択的オートファジーもNRF2を活性化します：オートファジー受容体SQSTM1/p62はKEAP1と相互作用し、それを隔離してKEAP1を不活性化し、それによりNRF2の核内蓄積と細胞保護遺伝子の発現を促進します。 関連参考文献: PMID:20452972
• 未折りたたみタンパク質応答 (UPR) の間、NRF2は活性化され、小胞体ストレス下での酸化還元恒常性と細胞生存に寄与します。
• NRF2は、炎症性サイトカインの転写を阻害し、炎症性遺伝子近傍へのRNAポリメラーゼIIのリクルートを抑制することにより、マクロファージを介した炎症を抑制します。これは、NRF2の標準的な結合モチーフやROSレベルとは独立した機構です。
• NRF2はウイルス感染を制限します：STING1発現を抑制することで抗ウイルス細胞質DNAセンシングを抑制し、I型インターフェロン非依存的な機構を介して、いくつかの病原性ウイルス (例：SARS-CoV-2、HSV-1、ワクシニア、ジカウイルス) の複製を阻害します。 関連参考文献: PMID:30158636, PMID:33009401
• NRF2は広く発現しており、成体の筋肉、腎臓、肺、肝臓、および胎児の筋肉で最も高いレベルを示します。細胞質と核の両方に局在し、細胞シグナルに応答して動的にシャトルします。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• このポリクローナル抗体は、ヒトNRF2のアミノ酸366-605に対応する組換えタンパク質 (C末端領域を標的) に対して作製されました。全長および修飾型の両方を検出する可能性があります。ノックダウンまたはノックアウト対照を用いて、ご自身の実験系での特異性を確認することを検討してください。
• ウェスタンブロッティングでは、約68 kDaのバンドが期待されます。リン酸化やユビキチン化などの翻訳後修飾により、バンドシフトが生じる可能性があります。ローディングコントロールや検出試薬を最適化してください。
• IHC-Pでは、抗原賦活化とブロッキングの工程が重要です。NRF2を高発現する肝臓や腎臓などの陽性対照組織を使用してください。
• IF/ICCでは、透過化と固定の条件を最適化する必要があります。酸化ストレス下でのNRF2核移行は、処理細胞と未処理細胞を比較することで評価できます。
• ELISAへの応用では、適切な二次抗体との組み合わせ、またはサンドイッチ法の一部として抗体を使用することが含まれます。組換えタンパク質または細胞溶解物を用いて検証してください。

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