WB、IHC-P、IF/ICC、ELISA用抗NSUN2ポリクローナル抗体 - Q08J23

製品コア仕様・パラメータ

生物学的背景：NSUN2の機能と局在

• NSUN2はMISU、MRT5、SAKI、TRM4とも呼ばれるRNAシトシンC(5)-メチルトランスフェラーゼで、tRNA、mRNA、長鎖非コードRNAを含む様々なRNA種において5-メチルシトシン（m5C）の生成を触媒します。 関連文献: PMID:17071714 PMID:22995836 PMID:31199786
• tRNA前駆体中の特定のシトシン残基をメチル化します：イントロンを含むtRNA(Leu)(CAA)の34位と48位、tRNA(Gly)(GCC)の48～50位です。この修飾はtRNAの安定性とtRNA由来断片の生成に不可欠です。 関連文献: PMID:17071714 PMID:22995836 PMID:31199786
• mRNAにおいて、NSUN2が媒介するm5Cメチル化はYBX1タンパク質を動員します。YBX1は修飾された転写産物に結合して分解から保護し、これによりmRNAの安定性を向上させます。 関連文献: PMID:22395603 PMID:31358969 PMID:34556860
• mRNAのm5C修飾は、アダプタータンパク質ALYREF/THOC4による認識を介して核外輸送を促進し、メチル化と転写産物の核-細胞質トラフィッキングを結びつけます。 関連文献: PMID:28418038
• NSUN2はVTRNA1.1などの非コードボルトRNA（vtRNA）をメチル化し、表皮分化を制御する低分子制御RNA（svRNA4）へのプロセシングを促進します。 関連文献: PMID:23871666 PMID:31186410
• また、ミトコンドリアtRNAを標的としてC5メチル化を行い、ミトコンドリア遺伝子発現にも制御的役割を持つことが示されています。 関連文献: PMID:31276587
• 細胞内では、核小体、核質、細胞質、ミトコンドリア、有糸分裂紡錘体に存在し、エクソソームを介して分泌されます。このことは、多様な機能的局在を反映しています。
• 成体および胎児の脳、リンパ芽球様細胞で発現され、細胞周期、分化、精子形成などの重要なプロセスに関与しています。変異は知的障害と関連しています。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• ウエスタンブロッティングの場合、総タンパク質溶解物を20～50 µgロードすることを推奨します。内在性NSUN2のバンドは約86 kDaに出現します。ご使用のサンプルに合わせてブロッキングと一次抗体の希釈率を最適化してください。
• 免疫組織化学（パラフィン切片）では、クエン酸緩衝液pH6.0などによる加熱誘発性抗原賦活化を推奨します。特異的な染色を得るために抗体の滴定を行ってください。
• 免疫蛍光の場合、4%パラホルムアルデヒドで固定し、0.1% Triton X-100で透過処理することを推奨します。局在を確認するために適切なコントロールを設定してください。
• 供給元のデータによると、本抗体はマウスおよびラットNSUN2と交差反応します。目的の種および組織における特異性は、ノックアウトまたはノックダウンモデルを用いて検証してください。
• 免疫原はアミノ酸617～708番（C末端領域）をカバーしています。ポリクローナル血清は複数のアイソフォームまたは分解産物を認識する可能性があることにご留意ください。
• ELISA用途では、コーティング抗原濃度と抗体希釈率を最適化し、バックグラウンドを評価するために陰性対象ウェルを設定してください。

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