抗リン酸化EGFR (T669) ポリクローナル抗体（WB、IP、ELISA用） - P00533

中核製品仕様とパラメーター

生物学的背景：EGFRの機能と局在

• EGFRは受容体型チロシンキナーゼであり、EGFファミリーリガンド（EGF、TGFA、AREGなど）に結合し、受容体のホモまたはヘテロ二量体化と重要な細胞質内残基の自己リン酸化を引き起こし、それによって複数のシグナル伝達カスケードを開始します。 関連参考文献： PMID:10805725, PMID:27153536, PMID:2790960, PMID:12297049, PMID:15611079, PMID:17909029
• 自己リン酸化されたEGFRはGRB2などのアダプタータンパク質をリクルートし、少なくとも4つの主要な下流経路：RAS-RAF-MEK-ERK、PI3K-AKT、PLCgamma-PKC、およびSTATモジュールを活性化し、これらが細胞増殖、生存、遊走を調節します。 関連参考文献： PMID:27153536
• EGFRは、RGS16（そのGTPase活性を活性化）やMUC1（SRCおよびβ-カテニンとの相互作用を増加）などの他のシグナル伝達タンパク質を直接リン酸化し、それによってGタンパク質共役受容体シグナル伝達および細胞接着プロセスに結合します。 関連参考文献： PMID:11602604, PMID:11483589
• スレオニン669 (T669) でのリン酸化は、EGFRキナーゼ活性と下流シグナル伝達を調節する重要な制御イベントであり、しばしば受容体活性化とシグナル伝達に関連しています。
• EGFRのアイソフォーム2は、EGF作用の天然の拮抗薬として機能し、シグナル伝達調節の追加の層を提供する可能性があります。
• EGFRはまた、C型肝炎ウイルス侵入のための宿主細胞受容体として利用され、CD81-CLDN1受容体複合体の形成を促進します。
• 細胞内局在に関して、EGFRは細胞膜、小胞体、ゴルジ装置、核、およびエンドソームに局在し、区画間の輸送がシグナル出力に影響を与えます。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原はT669周辺の合成リン酸化ペプチドです。リン酸化特異性を確認するには、サンプルをラムダホスファターゼで処理し、ウェスタンブロットでシグナルの消失を観察してください。
• WBでは、130-140 kDa範囲の高品質タンパク質ラダーの使用を検討し、適切なローディングコントロールを含めてください。既知のEGFR発現を持つターゲット細胞株で抗体を検証してください。
• IP実験では、抗体とライセートの比率を最適化し、既知のEGFR相互作用分子の共免疫沈降またはパン-EGFR抗体によるブロッティングにより、免疫沈降の成功を確認してください。
• ELISAプロトコルでは、リン酸化ペプチドまたは全長タンパク質をコーティングする必要がある場合があります。最適な抗体濃度と抗原濃度を決定するためにチェッカーボード滴定を行ってください。
• 交差反応性はヒトEGFRに限定されています。マウスまたはラットのサンプルを扱う場合は、交差反応性を実験的に検証するか、種特異的試薬を検討してください。
• ウサギポリクローナル抗体として、検出には適切な抗ウサギ二次抗体を使用してください。ポリクローナルロットはばらつきがある可能性があるため、新しいロットごとに滴定してください。

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