抗リン酸化EGFR-Y1173 ウサギポリクローナル抗体（WB、ELISA用） - P00533

製品の主な仕様・パラメータ

生物学的背景：EGFRの機能と局在

• 上皮成長因子受容体（EGFR）は、EGFファミリーのリガンドに結合する受容体型チロシンキナーゼで、RAS-RAF-MEK-ERK、PI3K-AKT、PLCγ-PKC、STATなど複数のシグナル伝達カスケードを活性化し、増殖、遊走、生存などの細胞応答を制御します。 関連文献: PMID:27153536, PMID:10805725, PMID:2790960
• リガンド結合後、EGFRはホモ二量体化またはヘテロ二量体化し、Y1173を含む細胞質側の主要なチロシン残基で自己リン酸化を起こします。これによりGRB2などのアダプタータンパク質の結合部位が形成され、下流のシグナル伝達が伝搬されます。 関連文献: PMID:12297049, PMID:15611079
• EGFRはRGS16やMUC1などの基質を直接リン酸化するほか、NF-κBシグナル伝達にも関与し、Gタンパク質共役受容体経路や細胞接着との連携を担っています。 関連文献: PMID:11602604, PMID:11483589, PMID:11116146
• EGFRのアイソフォーム2はEGF作用のアンタゴニストとして機能する可能性があり、特に卵巣がんで発現が認められています。
• EGFRは主に細胞膜に局在しますが、小胞体、ゴルジ体、核、エンドソームにも存在するほか、分泌されることもあり、動的なトラフィッキングとシグナル伝達機能を反映しています。
• 主要な翻訳後修飾として、チロシン・セリン・スレオニンのリン酸化、グリコシル化、ユビキチン化、パルミトイル化があり、これらによって活性、安定性、相互作用ネットワークが制御されています。
• EGFRは遍在的に発現し、発生、記憶・学習、疼痛シグナル伝達に関与するほか、その制御異常は様々ながんの発症に関わっています。
• EGFRはC型肝炎ウイルス（HCV）の侵入時の宿主細胞受容体としても機能し、肝細胞へのウイルス内在化を促進します。

実験ガイダンスと技術的なヒント

• 本抗体の免疫原はヒトEGFRのY1173に特異的な合成リン酸化ペプチドです。ウエスタンブロットの場合、サンプル調製時にリン酸化状態を維持するため、リン酸化特異的溶解バッファーとフォスファターゼ阻害剤の使用を推奨します。
• EGFRはリガンド刺激によってリン酸化度が大きく上昇するため、回収前に細胞をEGFで処理することでWBでのシグナル検出が向上します。逆に、血清飢餓やフォスファターゼ処理を行うことで、リン酸化特異性を確認できます。
• ELISAの場合、本抗体をトータルEGFR捕捉抗体を用いたサンドイッチ法で使用することで、細胞ライセートや組織抽出物中のリン酸化EGFRの量を定量できます。
• WBおよびELISAの両方で、非リン酸化ペプチドによる交差吸着を行うことで、リン酸化特異性を確認できます。

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