WB、IF/ICC、ELISA用 抗リン酸化EGFR-Y845 モノクローナル抗体 - P00533

主要製品仕様とパラメータ

生物学的背景: EGFRの機能と局在

• EGFR（上皮成長因子受容体）は、ErbB-1またはHER1とも呼ばれ、ERBBファミリーに属する膜貫通型受容体型チロシンキナーゼです。選択的スプライシングにより生じるアイソフォーム2は、EGF作用の拮抗剤として機能する可能性があります。
• 受容体型チロシンキナーゼとして、EGFRは様々なEGFファミリーリガンドに結合し、細胞外シグナルを増殖、分化、生存などの適切な細胞応答に変換する細胞内シグナルカスケードを引き起こします（PubMed:10805725, PubMed:27153536, PubMed:2790960）。 関連文献: PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960
• 既知のリガンドには、EGF、TGFA/TGF-α、AREG、エピジェン/EPGN、BTC/ベータセルリン、エピレグリン/EREG、HBEGF/ヘパリン結合性EGFが含まれます（PubMed:12297049, PubMed:15611079, PubMed:17909029）。 関連文献: PMID:12297049 PMID:15611079 PMID:17909029
• リガンド結合は、受容体のホモおよび/またはヘテロ二量体化を誘導し、続いて細胞質内の重要なチロシン残基での自己リン酸化を引き起こします。キナーゼドメインの活性化ループに位置するリン酸化チロシン845（Y845）は、活性型コンフォメーションを安定化し、触媒活性を高めるために重要です。
• 自己リン酸化は、GRB2などのアダプタータンパク質のリクルートを導き、RAS-RAF-MEK-ERK、PI3K-AKT、PLCγ-PKC、STATs、そしておそらくNF-κBを含む複数の下流モジュールを活性化します（PubMed:11116146, PubMed:27153536）。 関連文献: PMID:11116146 PMID:27153536
• EGFRは、RGS16（そのGTPase活性を活性化）やMUC1（SRCおよびβ-カテニンとの相互作用を増強）など、他のタンパク質を直接リン酸化します（PubMed:11602604, PubMed:11483589）。 関連文献: PMID:11602604 PMID:11483589
• CCDC88A/GIVとの相互作用を介して細胞遊走を正に調節し、リガンド刺激時にEGFRを細胞膜に保持します（PubMed:20462955）。 関連文献: PMID:20462955
• EGFRは主に細胞膜に局在しますが、小胞体、ゴルジ装置、核、エンドソームにも見られ、エクソソーム中に分泌されることもあります。広く発現しており、アイソフォーム2は特に卵巣癌で検出されます。
• 正常な生理学的役割に加えて、EGFRはC型肝炎ウイルス（HCV）侵入のための宿主細胞受容体として機能し、CD81-CLDN1共受容体複合体の形成を媒介し、ウイルス膜融合を促進します。

実験ガイドと技術的ヒント

• この抗体はリン酸化依存的エピトープを認識するため、リン酸化シグナルを保持するために、細胞溶解バッファーにホスファターゼ阻害剤を含め、低温で迅速にサンプルを処理してください。
• ウェスタンブロットでは、約134 kDa付近に主要なバンドが期待されます。リン酸化特異性を確認するには、細胞溶解物をラムダホスファターゼで処理するか、免疫原ペプチドの非リン酸化対応物を用いたペプチド競合アッセイを実施することを検討してください。
• 免疫蛍光/ICCでは、主に膜関連の染色パターンが予想されます。細胞膜マーカーとの共染色は局在確認に役立ちます。
• ELISA用途では、この抗体はリン酸化EGFRの捕捉または検出に使用できます。コーティングおよび検出条件は経験的に最適化してください。
• ヒトに対する反応性は検証済みです。他の種については、Y845周辺の配列相同性と交差反応性を実験的に確認してください。

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