ウエスタンブロット、IF/ICC、ELISA用 抗リン酸化-mTOR-S2448 ウサギポリクローナル抗体 - P42345

主要製品仕様とパラメータ

生物学的背景：セリン/スレオニンプロテインキナーゼmTORの機能と局在

• セリン/スレオニンプロテインキナーゼmTOR（MTOR、別名FRAP/FRAP1/FRAP2/RAFT1/RAPT1）は、289 kDaの細胞代謝、成長、生存のマスター調節因子であり、ホルモン、栄養、ストレスシグナルを統合します。 関連参考文献: PMID:12087098 PMID:12150925 PMID:12150926
• MTORは、サブユニット組成、上流調節、下流標的が異なる2つの複合体、mTORC1とmTORC2の触媒コアとして機能します。 関連参考文献: PMID:15268862 PMID:15467718 PMID:18497260
• 活性化されたmTORC1は、EIF4EBP1をリン酸化してeIF4Eへの阻害を解除し、RPS6KB1/2をリン酸化してリボソームタンパク質S6のリン酸化と翻訳開始を促進することにより、タンパク質合成を促進します。 関連参考文献: PMID:12087098 PMID:12150925 PMID:12150926 PMID:24403073 PMID:29236692 PMID:18925875
• mTORC1は、それぞれSREBF1/SREBP1とCADを活性化することにより、脂質およびヌクレオチド合成を刺激し、細胞成長のための高分子生産を調整します。 関連参考文献: PMID:23429703 PMID:23429704 PMID:23426360
• 栄養充足条件下では、mTORC1はULK1（Ser‑758）、DAP、RUBCNL、AMBRA1などの主要なオートファジー調節因子をリン酸化することによりオートファジーを抑制します。 関連参考文献: PMID:32561715 PMID:20537536 PMID:30704899 PMID:23524951 PMID:25438055
• mTORC2複合体は、Ser‑473のAKT、PKC、SGK1を含むAGCキナーゼをリン酸化し、細胞生存、増殖、およびアクチン細胞骨格の再編成を調節します。 関連参考文献: PMID:15268862 PMID:15467718 PMID:21376236 PMID:15718470 PMID:24670654
• MTORは、リソソーム、小胞体、ゴルジ体、ミトコンドリア、および核膜に動的に局在します。mTORC1の活性化は、リソソーム表面へのリクルートメントと密接に連動しています。
• MTORは広く発現しており、精巣で最も高レベルであり、広範なリン酸化、アセチル化、ユビキチン化によって調節されます。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原はSer‑2448をまたぐ合成リン酸化ペプチドであるため、この抗体はこの残基がリン酸化された場合にのみmTORを認識します。ウエスタンブロットでは、適切な刺激（例：成長因子、アミノ酸）で細胞を処理し、リン酸化を保持するためにリン酸阻害剤を溶解バッファーに加えてください。
• 289 kDaのmTORタンパク質のウエスタンブロッティングでは、低濃度のポリアクリルアミドゲル（例：6〜8％）と長い転写時間を使用してください。転写効率は予染色マーカーで確認してください。
• 免疫蛍光（IF/ICC）では、パラホルムアルデヒドで細胞を固定し、適切に透過処理を行い、非特異的結合を減らすためにブロッキングバッファーを使用してください。mTORC1活性化を研究する場合は、リソソームマーカーとの共染色で局在を確認してください。
• ELISAアプリケーションでは、ペプチドまたはタンパク質をコーティングすることが含まれる場合があります。特定のマトリックスでアッセイ条件（コーティングバッファー、ブロッキング剤、抗体希釈）を検証してください。

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