抗リン酸化NCF4（p40-phox）T154 ウサギポリクローナル抗体（WB・ELISA用） - Q15080

主な製品仕様・パラメータ

生物学的背景：NCF4/p40-phoxの機能と局在

• NCF4は好中球細胞質因子4（p40-phoxとも呼ばれる）をコードしており、食細胞のNADPHオキシダーゼ複合体に必須の制御サブユニットです。
• 他の細胞質因子と共に、p40-phoxはNOX2酵素複合体の集合と活性化に関与し、スーパーオキシドアニオンを生成して微生物を殺菌します。
• このタンパク質はN末端にPXドメインを持ち、ホスファチジルイノシトール3-リン酸と結合して、複合体をファゴソーム膜およびエンドソーム膜に局在させます。
• 中央部のSH3ドメインが他のオキシダーゼサブユニットとの相互作用を媒介し、複合体の集合を促進します。
• Thr154のリン酸化は活性化に極めて重要で、コンフォメーション変化と膜への移行を促します。
• 造血細胞に特異的に発現し、NCF4は自然免疫防御に特化した役割を担っています。
• NCF4の変異は慢性肉芽腫症（CGD）と関連しており、スーパーオキシド生成不全による再発性感染症を特徴とします。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 非リン酸化ペプチドと抗体を事前にインキュベートするか、細胞溶解液をホスファターゼで処理することで、リン酸化特異性を確認してください。シグナルが消失することで、リン酸化依存性であることが確認できます。
• ウエスタンブロットでは、ホルボールエステルで刺激した好中球またはHL-60細胞溶解液を陽性コントロールとして使用し、抗体の希釈倍率を最適化してください。また、リン酸化を保持するために、溶解バッファーにホスファターゼ阻害剤を添加してください。
• ELISAでは、リン酸化ペプチド免疫原をコーティングし、非リン酸化ペプチドとの結合能を比較することで特異性を評価できます。
• 全NCF4抗体を用いてメンブレンのストリッピング（剥離）と再プローブを行い、タンパク質発現量に対するリン酸化レベルを正規化することを推奨します。

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