WB、ELISA用 抗リン酸化NF-kB p65/RelA-S311 ウサギpAb - Q04206

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：転写因子p65の機能と局在

• NF-κBは、ほぼすべての細胞種に存在する多機能性転写因子であり、様々なシグナル伝達カスケードの終点として機能する。ホモまたはヘテロ二量体を形成し、ヘテロ二量体RELA-NFKB1複合体が最も豊富で、転写活性化因子として働く。
• RELA (p65) は、標的遺伝子プロモーター内のκB部位に、二量体特異的な親和性と特異性で結合し、転写を直接活性化するとともに、他の因子へのクロマチンアクセシビリティを間接的に調節する。
• 未刺激細胞では、NF-κB複合体はI-κB阻害因子によって細胞質内で不活性状態に保持されている。刺激を受けると、I-κBはIKKによってリン酸化され分解され、RELAが核へ移行して遺伝子発現を開始する。
• RELAは、その活性、安定性、タンパク質間相互作用を調節する、複数部位（例：S311）でのリン酸化、アセチル化、メチル化、ユビキチン化を含む広範な翻訳後修飾を受ける。
• T細胞におけるサイトカイン遺伝子発現に必須であり、適応免疫応答におけるその重要な役割を強調している。
  関連参考文献： PMID:15790681
• SARS-CoV-2感染時のインターフェロン応答を制御する主要な転写因子として同定されている。 関連参考文献： PMID:33440148
• 静止状態では、核局在シグナルがI-κBによってマスクされているため、主に細胞質に局在する。活性化後は急速に核内に蓄積する。
• リン化タンパク質、アセチル化、メチル化、Ubl結合、イソペプチド結合、S-ニトロソ化を含むキーワードで注釈されており、この主要転写因子を制御する複雑な調節ネットワークを反映している。

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原であるS311をカバーする合成リン酸化ペプチドは、リン酸化型特異的な抗体を産生するように設計されている。リン酸化特異性を確認するには、WB前にリシェートをラムダホスファターゼで処理して検証する。
• 供給業者による推奨適用：WBおよびELISA。WBでは、20〜30 µgの全細胞リシェートと標準的なブロッキングバッファーを使用し、適切な陽性コントロール（例：TNF-α刺激HeLa細胞）を用いて約60 kDaのバンドサイズを確認する。
• ELISAでは、リン酸化ペプチドをコーティングし、その非リン酸化対応物を陰性コントロールとして使用して、部位特異的結合を確認することを検討する。
• ヒトおよびマウスと交差反応する。これらの種の関連する細胞株または組織で初期検証を行う。リン酸化シグナルを増強するために、TNF-αやPMA/イオノマイシンなどの刺激によるNF-κBシグナル伝達の誘導が推奨される。
• リン酸化状態を変化させる可能性のある過酷な膜剥離は避け、再プロービングが必要な場合は、低pHまたはマイルドな界面活性剤を含むバッファーを使用する。

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