WB、IF/ICC、ELISA用 抗リン酸化NF-kB p65/RelA (S536) モノクローナル抗体 - Q04206

中核製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：NF-κB p65/RelAの機能と局在

• RELAは、転写因子p65（核因子NF-kappa-B p65サブユニットとしても知られる）をコードしており、これはNF-κB複合体の中心的なサブユニットです。
• NF-κBは、炎症、免疫、細胞増殖、分化、腫瘍形成、およびアポトーシスに関与する遺伝子を制御する多機能転写因子であり、様々な刺激により活性化されます。
• p65は他のRelタンパク質とホモまたはヘテロ二量体を形成します。RELA-NFKB1ヘテロ二量体が最も豊富で、転写を活性化します。
• 静止細胞では、NF-κBはIκB阻害因子によって細胞質に保持されています。活性化されると、IκBは分解され、NF-κBは核へ移行しDNAに結合できるようになります。
• 転写活性化ドメイン内のセリン536（S536）でのリン酸化は、転写活性化を増強し、NF-κB経路活性化のマーカーとして機能します。
• p65は核と細胞質の両方に局在し、シグナルに応答してシャトリングします。
• p65は、その機能を調節する複数の翻訳後修飾（リン酸化、アセチル化、メチル化、ユビキチン化、S-ニトロシル化）を受けます。
• p65は、T細胞におけるサイトカイン遺伝子発現に必須であり、SARS-CoV-2感染時のインターフェロン応答を調節します。 関連参考文献： PMID:15790681, PMID:33440148

実験ガイダンスおよび技術的ヒント

• 免疫原はS536周辺の合成リン酸化ペプチドです。アッセイにおけるリン酸化特異性を確認するために、非リン酸化ペプチドコントロールの使用を検討してください。
• ウェスタンブロットでは、約65 kDaの主要なバンドが期待されます。活性化依存的なリン酸化を確認するために、刺激された細胞と未刺激の細胞ライセートでの検出を検証してください。
• 免疫蛍光/ICCでは、適切な透過処理を含め、移行を可視化するために全p65抗体または核マーカーとの共染色を検討してください。
• ELISAプロトコルでは、リン酸化p65を捕捉するためにこの抗体を使用できます。特定のサンプルマトリックスに対して、コーティングおよび検出条件を最適化してください。

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