抗リン酸化NF-kB p65/RelA-S536 ウサギポリクローナル抗体（WB、IF/ICC、ELISA対応） - Q04206

製品コア仕様・パラメータ

生物学的背景：転写因子p65の機能と局在

• NF-kappa-B p65サブユニット（RELA）はNF-kappa-Bファミリーの中心的な転写因子で、分子量60kDaのタンパク質をコードしており（p65、NFKB3、CMCU、AIF3BL3としても知られています）、免疫応答およびストレス応答において重要な役割を担っています。UniProtエントリはQ04206です。
• NF-kappa-B複合体はホモ二量体またはヘテロ二量体として存在し、RELA-NFKB1（p50）ヘテロ二量体が最も多く存在し、遺伝子プロモーター内の特異的κB DNAモチーフに結合することで転写活性化因子として機能します。
• NF-kappa-Bの活性化には、刺激に誘導されたIκB阻害剤のリン酸化と分解が関与しており、RELA複合体が遊離されて細胞質から核へと移行します。転写活性化ドメインに位置するRELAのSer536のリン酸化は転写活性を高め、カノニカルNF-κB活性化の特徴です。
• RELAの亜細胞局在は厳密に制御されており、静止状態の細胞では主に細胞質でIκBと結合して存在しています。刺激後は核に蓄積し、標的遺伝子の発現を調節します。免疫蛍光法では経路活性化の指標として核移行を検出することができます。
• RELAはリン酸化、アセチル化、メチル化、S-ニトロシル化、ユビキチン化などの多くの修飾を受け、これらの修飾によって転写出力が精密に調整されています。T細胞におけるサイトカイン発現（PubMed:15790681）やSARS-CoV-2感染時のI型インターフェロン応答（PubMed:33440148）に必須であることが知られています。 関連参考文献: PMID:15790681 PMID:33440148
• RELA遺伝子は複数のアイソフォームをコードしており、その活性は補因子やクロマチンリモデリング因子との相互作用を介して調節されており、単純な核侵入以外にも複雑な制御層が存在することが示されています。

実験ガイダンス・技術的ヒント

• Ser536のリン酸化を保存するため、細胞または組織溶解液の調製時にはプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテルを添加してください。ウェスタンブロッティングでは、SDS-PAGEでタンパク質を分離した後、使用者自身で検証した開始希釈率で本抗体を用いてプローブしてください。60kDa付近に明確なバンドが検出されることが予想されます。
• 免疫蛍光法または免疫細胞化学（IF/ICC）の場合、細胞を4%パラホルムアルデヒドで固定し、十分に透過処理を行ってください。非特異的結合を低減するために適切なブロッキングバッファーを使用してください。炎症刺激（例：TNF-α処理）下でのNF-kB p65の核移行を解析することで、リン酸化特異的シグナルの検証を行うことができます。
• ELISA用途では、リン酸化特異的な検出を確認するためにリン酸化ペプチドによるブロッキングコントロールの使用を推奨します。ご自身のアッセイ系における最適濃度を決定するために、抗体の滴定を行ってください。
• リン酸化の動態は細胞種によって異なる可能性があるため、結果を正確に解釈するために、常に陽性コントロールと陰性コントロール（例：刺激細胞 vs 非刺激細胞）を含めてください。

CamelBioについて：ワンストップ調達ブリッジ

CamelBioは、診断薬メーカー、研究機関、ラボに対し、コンセプトから臨床までの全段階をカバーする高品質IVD原料、技術サービス、コンサルティングのワンストップ調達ソリューションを提供しています。本抗リン酸化NF-kB p65/RelA-S536ウサギポリクローナル抗体は、炎症、腫瘍学、免疫学研究に関連するNF-kBシグナル伝達経路研究向けの高品質免疫測定試薬を供給するという弊社の取り組みを体現する製品です。単一の抗体に留まらず、検証済みの抗体ペア、最適化された組換えタンパク質、重要な補助原料を提供しており、これらはすべてアッセイ開発の効率化を目的として設計されています。