抗リン酸化NF-kB p65/RelA（Ser468）ウサギモノクローナル抗体（WB、IP、ELISA用） - Q04206

主要製品仕様・パラメータ

生物学的背景：NF-kB p65/RelAの機能と局在

• 転写因子p65（RelA）はNF-kB転写因子複合体のp65サブユニットであり、ほぼ全ての細胞種に存在する多機能因子です。炎症、免疫、分化、細胞成長、腫瘍形成、アポトーシスに関連する多様な刺激によって開始されるシグナル伝達経路のエンドポイントとして機能します。
• NF-kBはRelドメインを持つタンパク質のホモ二量体またはヘテロ二量体として機能します。最も多く存在する形態はRELA-NFKB1（p65-p50）ヘテロ二量体です。これらの二量体はカッパB DNA部位に対してそれぞれ異なる親和性で結合し、RELA-NFKB1およびRELA-REL複合体が転写活性化因子として働きます。
• NF-kBの活性は、翻訳後修飾、細胞内区画化、補因子またはコリプレッサーとの相互作用を含む複数の機構によって制御されています。不活性型のNF-kBはI-kB阻害タンパク質によって細胞質に保持されており、IKKを介したI-kBのリン酸化と分解によってNF-kB複合体が放出され、核に移行します。
• RELAは固有のDNA結合親和性が弱いものの、NF-kB複合体のDNA結合能に寄与しています。また、標的プロモーターのクロマチンアクセシビリティを調節し、遺伝子発現に間接的に影響を与えます。
• RELAはT細胞におけるサイトカイン遺伝子発現に必須であり、適応免疫応答において中心的な役割を果たします。 関連文献: PMID:15790681
• SARS-CoV-2感染時には、RELAがインターフェロン応答を制御する重要な転写因子として働き、抗ウイルス自然免疫における役割が裏付けられています。 関連文献: PMID:33440148
• 細胞内では、RELAは細胞質と核の間を往復輸送されます。本抗体が標的とするSer468でのリン酸化をはじめ、アセチル化、メチル化、S-ニトロシル化、ユビキチン様結合など、多くの翻訳後修飾を受けており、これらの修飾によって活性、安定性、相互作用が調節されています。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• ウエスタンブロット（WB）の場合、Ser468のリン酸化シグナルを保持するため、プロテアーゼ阻害剤とホスファターゼ阻害剤を添加したRIPAバッファーで溶解物を調製してください。SDS-PAGEと転写を実施後、実験的に決定した希釈度で抗体を用いてプローブしてください。
• 免疫沈降（IP）実験では、使用する細胞または組織溶解物中の標的タンパク質の発現量が十分であることを確認してください。本抗体はウサギ由来のモノクローナル抗体であるため、種を一致させた二次試薬を用いることで、クリーンな捕捉が容易になります。
• ELISAベースの検出では、本抗体を捕捉試薬または検出試薬として使用することを検討し、適切なリン酸特異的コントロールを用いて、使用するアッセイ系での直線性と特異性を検証してください。
• 本抗体はヒト、マウス、ラットと交差反応するため、これらの種間での比較研究に使用できます。ただし、各種および各処理条件において必ず陽性対照と陰性対照を含めて性能を確認してください。
• 推奨希釈率は実験条件や検出方法によって変動する可能性があるため、各用途およびサンプルタイプに応じて抗体濃度を最適化してください。

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