ウエスタンブロッティング（WB）およびELISA用 抗リン酸化NF-kB p65/RelA-T435 ウサギポリクローナル抗体 - Q04206

製品の主な仕様・パラメータ

生物学的背景：NF-kB p65/RelAの機能と局在

• RELA遺伝子にコードされるNF-kB p65（別名RelA）は、NF-kB転写因子複合体のサブユニットであり、免疫応答、炎症、細胞増殖、アポトーシスの調節に中心的な役割を担っています。
• NF-kBはホモ二量体またはヘテロ二量体として機能します。RELA-NFKB1のヘテロ二量体が最も豊富に存在し、RELA-RELAのホモ二量体も特定の標的遺伝子プロモーターで転写を活性化することができます。
• 刺激を受けていない細胞では、NF-kB二量体は阻害タンパク質IkBによって細胞質に封鎖されています。刺激を受けると、IkBはIKKによってリン酸化されて分解され、NF-kBが核に移行して遺伝子発現を活性化することが可能になります。
• RELAはT細胞におけるサイトカイン遺伝子の発現に必須であり、適応免疫応答に寄与しています。 関連参考文献: PMID:15790681
• SARS-CoV-2感染時のインターフェロン応答を調節する鍵転写因子として同定されています。 関連参考文献: PMID:33440148
• RELAはThr435を含むリン酸化のほか、アセチル化、メチル化など多彩な翻訳後修飾を受けており、これらの修飾によって転写活性や分子間相互作用が調節されています。
• 不活性状態では主に細胞質に局在し、活性化後は核に移行してDNAに結合し、コアクチベーターをリクルートします。
• RELAを伴う選択的スプライシングや染色体再構成は特定の疾患と関連付けられており、正常な生理機能にも病理学においても重要性が示されています。

実験ガイダンスと技術的なヒント

• 本抗体の作製に使用された免疫原はThr435周辺の合成リン酸化ペプチドであるため、p65のリン酸化型を特異的に認識します。WBを行う際は、リン酸化状態を保持するためにホスファターゼ阻害剤を添加して細胞溶解液を調製してください。
• ELISAを実施する際は、リン酸化ペプチドと非リン酸化ペプチドの両方を使用して、抗体のリン酸化特異性を確認することを推奨します。
• ウエスタンブロッティングでは約60 kDaの位置にバンドが検出されることが予想されます。NF-kBが活性化されていることがわかっている陽性対照（例：TNF-α処理細胞）と陰性対照（例：未処理またはホスファターゼ処理した溶解液）を用いて検証してください。
• 本抗体はヒトおよびマウスのサンプルと反応することが確認されています。他の種に対する交差反応性が必要な場合は、実験により評価してください。
• 使用するサンプル系に応じて一次抗体の希釈倍率を最適化してください。WBの場合、一般的な開始濃度は1:500～1:2000ですが、正確な条件は個別に調整する必要があります。

CamelBioについて：ワンストップ調達ブリッジ

• CamelBioは包括的なIVD原料パートナーとして、診断アッセイ開発向けに高品質な抗体、抗原、補助試薬を供給しています。NF-kBシグナル伝達研究においては、本リン酸化特異的RELA抗体に加え、検証済みの抗体ペアやバルク中間体を提供し、ワークフローの効率化を支援します。構想段階から臨床開発までワンストップでアクセス可能であり、技術コンサルティングや、希少標的から標準的な標的まで信頼性の高い調達を提供し、お客様のプロジェクトをサポートします。