IF/ICC用 抗リン酸化NFKB1-S893 ウサギポリクローナル抗体 - P19838

中核製品仕様とパラメーター

生物学的背景: NFKB1の機能と局在

• NF-κBは多機能性転写因子であり、炎症、免疫、分化、細胞増殖、腫瘍形成、アポトーシスなど、幅広い生物学的プロセスを調節し、ほぼすべての細胞種で発現しています。
• NFKB1遺伝子はp105前駆体タンパク質をコードしており、これは二重の機能を持ちます：NF-κB複合体の細胞質内保持因子として働き、また、翻訳と共役したプロセシングを受けて活性型p50サブユニットを生成します。
  関連参考文献: PMID:1423592
• 活性型p50サブユニットは主にRELA/p65とヘテロ二量体を形成し、転写活性を持つNF-κB複合体となり、免疫および急性期反応に関与する遺伝子のエンハンサー領域内にあるコンセンサスκB DNA配列5'-GGRNNYYCC-3'に結合します。
  関連参考文献: PMID:1740106, PMID:7830764
• 二量体の構成に応じて、NF-κB複合体は転写活性化因子（例：p65-p50）または抑制因子（例：p50-p50ホモ二量体）として機能し、遺伝子発現を微調整します。
• 未刺激細胞では、NF-κBはIκB阻害タンパク質によって細胞質内に隔離されています。多様な刺激によって活性化されると、IκBはリン酸化され分解され、NF-κBの核内移行が可能になります。
• NFKB1タンパク質は、リン酸化、アセチル化、ヒドロキシル化、S-ニトロシル化、ユビキチン化など、広範な翻訳後修飾を受けます。これらはその活性、安定性、タンパク質間相互作用を調節します。
• セリン893（S893）でのリン酸化は、p105のC末端のIκB様ドメイン内で起こります。この領域は通常、プロテアソームによるp50へのプロセシングの際に除去されるため、p105の細胞質内保持またはプロセシング動態における調節的役割が示唆されます。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原はヒトNFKB1のS893周辺配列に対応する合成リン酸化ペプチドであり、この抗体がこの部位でリン酸化されたNFKB1の形態を特異的に認識することを示しています。
• 免疫細胞化学/免疫蛍光法（ICC/IF）では、リン酸化状態を保持する適切な固定および透過化プロトコルを使用することを推奨します。メタノールまたはパラホルムアルデヒド固定が適している場合がありますが、ホスファターゼ阻害剤の有無でテストしてください。
• 抗体の特異性は、抗体をリン酸化ペプチド免疫原と前インキュベートするか、染色前に細胞をホスファターゼで処理することによって確認してください。
• S893リン酸化部位はp105のC末端IκB様ドメイン内に存在することに注意してください。このドメインは、成熟p50サブユニットを生成するプロテアソームプロセシングの間に分解されます。したがって、この抗体はリン酸化されたp105（約105 kDa）を検出し、切断されたp50生成物は検出しないと予想されます。
• 交差反応性はヒトでのみ実証されているため、関連するヒト細胞株または組織で抗体を検証してください。発現レベルは細胞種や刺激条件によって異なる場合があります。

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