抗リン酸化POLR2A CTD-S2 ポリクローナル抗体（WB・IP・ELISA用） - P24928

主要製品仕様・パラメータ

生物学的背景：POLR2A（DNA依存性RNAポリメラーゼIIサブユニットRPB1）の機能と局在

• POLR2AはRNAポリメラーゼII（Pol II）の最大かつ触媒活性を持つサブユニットをコードしています。Pol IIはDNA依存性RNAポリメラーゼで、mRNA前駆体や多くの機能的非コードRNAの合成を担っています（PubMed:23748380, PubMed:27193682, PubMed:30190596, PubMed:28108474）。 関連文献: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596 PMID:28108474
• 2番目に大きいサブユニットPOLR2Bと共にPol IIの活性中心を形成し、新生RNAへのヌクレオチド付加を行うとともに、3'→5'エキソヌクレアーゼ活性による校正機能を提供します（PubMed:30190596, PubMed:8381534, PubMed:9852112）。 関連文献: PMID:30190596 PMID:8381534 PMID:9852112
• 特有のC末端ドメイン（CTD）は52個のタンデム型7量体ペプチドリピート（YSPTSPS）から構成され、転写開始、伸長、終止、転写共役的mRNAプロセッシングを制御する因子を動的に集合させる足場として機能します。Ser5のリン酸化はプロモーター離脱を促進する一方、Ser2のリン酸化はポーズ解除と効率的な伸長に不可欠です（PubMed:24207025, PubMed:26124092）。 関連文献: PMID:24207025 PMID:26124092
• POLR2AはDNA依存性RNAポリメラーゼ活性に加え、RNA依存性RNAポリメラーゼ機能を持ち、非コードRNAの伸長や、デルタ肝炎ウイルスなどのウイルス複製に関与します。
• POLR2Aの翻訳後修飾にはリン酸化、アセチル化、メチル化、ユビキチン化があり、これらによって活性や相互作用が精密に制御されています。
• POLR2Aは主に核に局在しますが、細胞質や染色体に結合した状態でも存在し、転写を超えた機能を持つことが示唆されています。
• 計算上の分子量は約217 kDaです。

実験ガイダンスと技術的なヒント

• 免疫原はヒトPOLR2A CTDリピートのSer2に対応する合成リン酸化ペプチドです。抗体の特異性は、ホスファターゼ処理したライセートまたは非リン酸化ブロッキングペプチドを用いて確認してください。
• ウエスタンブロットを行う際は、リン酸化シグナルを維持するために、溶解バッファーとサンプルバッファーに適切なホスファターゼ阻害剤を添加してください。
• 免疫沈降を行う際は、リン酸化エピトープの完全性が保たれるよう溶解バッファーの組成を調整してください。ライセートのプレクリーニングにより非特異的結合を低減できます。
• ELISAの場合、免疫原に使用したリン酸化ペプチドをコーティングし、本抗体で検出することでリン酸化特異的結合を評価できます。非リン酸化ペプチド対照を用いて交差反応性を確認することを推奨します。
• 本抗体は類似のリン酸化モチーフを持つ他のタンパク質を認識する可能性があります。ご使用のサンプル系で検証を行ってください。

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