Anti-Phospho-POLR2A CTD-S7 Rabbit pAb for WB, IHC-P, ELISA, ChIP - P24928

主要な製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：POLR2Aの機能と局在

• POLR2A（RPB1またはPOLR2とも呼ばれる）は、RNAポリメラーゼII（Pol II）の最大サブユニットであり、mRNA前駆体および多くの機能性非コードRNAの合成を担うDNA依存性RNAポリメラーゼです。
• 第2サブユニットであるPOLR2Bと共に触媒コアを形成し、ヌクレオチド重合にはMg²⁺配位DxDGDモチーフを、校正には3'→5'エキソヌクレアーゼ活性を利用します。 関連参考文献： PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• 独自のC末端ドメイン（CTD）は52個のタンデムヘプタペプチドリピート（YSPTSPS）からなり、転写制御因子のプラットフォームとして機能します。Ser5のリン酸化はプロモーターのクリアランスを促進し、一方でSer2のリン酸化は一時停止の解除と伸長に必要です。 関連参考文献： PMID:24207025, PMID:26124092
• CTDのリシンアセチル化は増殖因子誘導性初期応答遺伝子を活性化し、一方でメチル化とジメチル化は標的遺伝子の発現を抑制し、転写出力を微調整します。 関連参考文献： PMID:24207025, PMID:26124092
• POLR2Aは主に核に局在しますが、細胞質や染色体でも検出され、転写におけるその動的な役割と一致しています。
• それは非コードRNAを伸長するRNA依存性RNAポリメラーゼとして作用し、D型肝炎ウイルスのレプリカーゼとして機能することもあります。
• POLR2Aに関連するキーワードには、ホスホタンパク質、アセチル化、メチル化、DNA結合、金属結合、転写、宿主-ウイルス相互作用、疾患バリアントが含まれ、その複雑な調節機構を反映しています。
• POLR2Aの変異は、知的障害（NEDHIB）などの神経発達障害と関連しています。

実験のガイダンスと技術的なヒント

• ウェスタンブロットでは、低濃度のSDS-PAGEゲル（例：6%またはグラデーション）を使用し、ウェット転写を行って217 kDaタンパク質を効率的に転写してください。
• 溶解バッファにホスファターゼ阻害剤カクテルを含めてS7リン酸化シグナルを維持します。ネガティブコントロールとして、非リン酸化ペプチドまたはホスファターゼ処理サンプルの使用を検討してください。
• IHC-Pでは、抗原回収条件（クエン酸またはEDTAベースのバッファー）を最適化し、ポリマー検出システムを使用してシグナルを増幅してください。
• ELISAでは、ポジティブコントロールとしてリン酸化ペプチドを、特異性の確認には対応する非リン酸化ペプチドを使用してください。
• ChIPでは、タンパク質をDNAに架橋し、クロマチンを200〜500 bpの断片にせん断します。この抗体は、活性転写遺伝子のプロモーター領域におけるPol IIを濃縮する可能性があります。
• 大規模な実験の前に、関連する種および組織コンテキストで抗体の性能を検証してください。

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