Anti-Phospho-Raf1-S259 ウサギモノクローナル抗体（WB・ELISA用） - P04049

主要製品仕様およびパラメータ

生物学的背景：RAF1の機能と局在

• RAF1（c-RAFまたはRaf-1としても知られる）は、セリン/スレオニンキナーゼであり、膜結合型Ras GTPアーゼと下流のMAPK/ERKシグナルカスケードとの間の重要な調節リンクとして機能し、増殖、分化、アポトーシス、生存などの細胞運命決定を制御します。
• 活性化すると、RAF1は二重特異性キナーゼMEK1/2をリン酸化して活性化し、MEK1/2はさらにERK1/2をリン酸化して、遺伝子発現と細胞応答を調節するシグナルを伝播します。
• リン酸化RAF1（例：Ser-338およびSer-339）は、プロアポトーシスタンパク質BADを直接リン酸化して細胞生存を促進します。また、アデニル酸シクラーゼ（ADCY2/5/6）をリン酸化し、ホスファターゼPPP1R12Aを調節します。
• RAF1は複数のシグナル伝達経路に影響を与えます：NF-κB活性化を促進する一方で、ROCK2（運動性）、ASK1/MST2（アポトーシス）、RB1（増殖/血管新生）などのエフェクターを阻害します。
• アポトーシス刺激下では、RAF1はミトコンドリアに移動し、そこでBCL2に結合してBADを置換することにより、追加の抗アポトーシス機構を提供します。
• RAF1はRhoシグナルを調節することで細胞移動に関与し、正常な創傷治癒に必要です。また、クローディン（OCLN）などのタイトジャンクションタンパク質の転写抑制を通じて、腫瘍形成変換にも寄与します。
• このタンパク質は主に細胞質と細胞膜に局在していますが、特定の条件下ではミトコンドリアや核にも見られます。
• RAF1は様々な組織で発現しています。骨格筋では、アイソフォーム2よりもアイソフォーム1が多く発現しています。

実験ガイダンスと技術的なヒント

• 免疫原は、ヒトRAF1 (P04049) のSer259を中心とした合成リン酸化ペプチドです。得られた抗体は、Ser259でリン酸化されたRAF1を特異的に認識すると期待されます。ホスファターゼ処理サンプルと未処理サンプルのシグナルを比較して特異性を確認してください。
• ウェスタンブロット（WB）では、RAF1を発現することが知られているヒトまたはラットの細胞からタンパク質抽出液を使用してください。還元条件下で約73 kDaのバンドが観察されるはずです。常に適切なポジティブコントロールおよびネガティブコントロール（血清飢餓ライセートと増殖因子刺激ライセートの比較など）を含めてください。
• ELISAでは、リン酸化ペプチド免疫原に対して抗体を滴定し、関連する生物学的マトリックスで検証して、線形な検出を確保してください。リン酸化レベルを正規化するために、全RAF1抗体との併用を検討してください。
• 抗体はアイスバッグで供給されるため、繰り返しの凍結融解を避け、推奨される条件下で保存して活性を維持してください。

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