抗リン酸化Raf1-S621 ウサギモノクローナル抗体（WB、ELISA用） - P04049

製品の主な仕様・パラメータ

生物学的背景：RAF1（c-Raf）の機能と局在

• RAF1（c-RafまたはRaf-1としても知られる）はセリン/スレオニンプロテインキナーゼであり、膜結合型Ras GTPaseとMAPK/ERKカスケード間の重要な制御的連結点として機能し、増殖、分化、アポトーシス、生存などの細胞運命決定を制御するスイッチとして働きます。
• 二重特異性MAPKキナーゼ（MAP2K1/MEK1およびMAP2K2/MEK2）ならびに細胞外シグナル調節キナーゼ（MAPK3/ERK1およびMAPK1/ERK2）を順次リン酸化することで、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（MAPK）カスケードを開始します。
• RAF1は多様な基質をリン酸化します：BAD（セリン75部位、PAK1を介する）、アデニル酸シクラーゼ（ADCY2、ADCY5、ADCY6）、PPP1R12A（ホスファターゼ活性を阻害）、TNNT2。またNF-κB活性化を促進し、ROCK2、ASK1、MST2キナーゼを阻害します。
• ミトコンドリアに移行してBCL2と結合しBADを置換することで、細胞をアポトーシスから保護します。またFas刺激、病原体介在性マクロファージアポトーシス、赤血球分化に応答したカスパーゼ活性化を制限します。
• 転写リプレッサーSNAI2/SLUGのアップレギュレーションを誘導することで密着結合タンパク質オクルディン（OCLN）を抑制し、発がん性形質転換に寄与します。
• 細胞内局在は細胞質、細胞膜、ミトコンドリア、核に及び、多面的な制御的役割を反映しています。
• ジンクフィンガードメインを持ちATPに結合し、リン酸化（例：S621）、メチル化を受けるほか、選択的スプライシングが生じます（アイソフォーム1は骨格筋により多く存在します）。
• RAF1に関連するキーワードとしては、心筋症、難聴、疾患変異体、プロトオンコジーン、セリン/スレオニンプロテインキナーゼがあり、正常生理と疾患の両方に関与することが示されています。

実験ガイダンス・技術的ヒント

• 免疫原は合成リン酸化ペプチドです。溶解および調製中にリン酸化状態を維持するため、サンプル処理にはホスファターゼ阻害剤を使用してください。
• ウエスタンブロッティングでは約73 kDaのバンドが検出されます。リン酸化特異性を確認するため、ホスファターゼ処理したライセートや刺激細胞vs非刺激細胞などの適切な対照を含めてください。
• RAF1のリン酸化は動的であるため、シグナルを正規化し活性化変化を正確に解釈するため、総RAF1抗体を並行して使用することを推奨します。
• ELISAでは、コーティング抗原濃度と抗体希釈倍率を最適化してください。既知のリン酸化ペプチドを用いた標準曲線は定量に役立つ可能性があります。
• ラット組織との交差反応性が報告されています。シグナル強度はサンプルによって異なる場合があるため、ご使用のラットモデル系で抗体の性能を検証してください。

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