抗リン酸化Raf1 (Ser621) ウサギポリクローナル抗体 - P04049

製品の主な仕様とパラメータ

生物学的背景：RAF1の機能と局在

• c-RafまたはRaf-1としても知られるRAF1は、RAF1遺伝子によってコードされるセリン/スレオニンプロテインキナーゼです。膜結合型Ras GTPアーゼとMAPK/ERKシグナル伝達カスケードの間の重要な調節リンクとして機能し、増殖、分化、アポトーシス、がん化などの主要な細胞プロセスを制御します。
• 活性化されたRAF1は、二重特異性キナーゼであるMAP2K1/MEK1およびMAP2K2/MEK2をリン酸化して活性化し、これらがさらに細胞外シグナル調節キナーゼであるMAPK3/ERK1およびMAPK1/ERK2をリン酸化して、下流へシグナルを伝達します。
• 標準的なMAPK経路を超えて、RAF1はBAD（Ser-75）、アデニル酸シクラーゼ（ADCY2、ADCY5、ADCY6）、PPP1R12A、TNNT2など、他の多くの基質をリン酸化し、アポトーシス調節やcAMPシグナル伝達などの多様な細胞機能と関連しています。
• RAF1は細胞質、細胞膜、ミトコンドリア、核に局在します。ミトコンドリアへの移行によりBCL2と結合し、BADを置換することで、追加のアポトーシス抑制メカニズムを提供します。
• 骨格筋では、RAF1のアイソフォーム1がアイソフォーム2よりも豊富であり、組織特異的な調節役割を示唆しています。
• RAF1は様々な癌に関与するがん原遺伝子であり、その調節不全の活性は、SNAI2/SLUGのアップレギュレーションを介してオクルディンなどのタイトジャンクションタンパク質を抑制することなどで、がん化を促進します。
• このタンパク質はジンクフィンガードメインを含み、リン酸化を含む複数の翻訳後修飾を受け、それによってキナーゼ活性と細胞内分布が厳密に制御されています。

実験ガイダンスと技術的なヒント

• この抗体は、ヒトRAF1のSer621に対応する合成リン酸化ペプチドに対して作製されました。この残基でリン酸化されたRAF1を特異的に認識することが期待されます。トータルRAF1の検出には、コントロールとしてパン抗体が必要になる場合があります。
• ウェスタンブロットでは標準的なプロトコルを使用しますが、リン酸化を維持するために、溶解バッファーおよびインキュベーションバッファーにホスファターゼ阻害剤が含まれていることを確認してください。適切なヒトサンプルにおいて、73 kDa付近のバンドの検出が予想されます。
• 免疫沈降では、実験系に合わせて抗体濃度とインキュベーション時間を最適化してください。プレクリアリングおよび適切なアイソタイプコントロールの使用を推奨します。
• ELISAにおいて、本抗体はキャプチャーまたは検出に使用可能です。リン酸化および非リン酸化ペプチドのコントロールを用いて、結合親和性と特異性を検証してください。
• 常に特定のサンプルマトリックスおよび実験条件下で抗体を検証してください。性能は細胞型や刺激状態によって異なる場合があります。

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