抗リン酸化SMO (S611/S615) ウサギポリクローナル抗体 (WB, ELISA用) - Q99835

製品の主要仕様とパラメータ

生物学的背景: SMOの機能と局在

• SMO (smoothened)はGタンパク質共役型受容体であり、胚発生や成体組織の恒常性維持に必須のHedgehogシグナル伝達経路の重要なトランスデューサーです。
• Hedgehogリガンドが存在しない場合、SMOはパッチド受容体(PTCH1/PTCH2)によって抑制され、コレステロールがSMOにアクセスするのを制限します。Hedgehogがパッチドに結合するとこの抑制が解除され、SMOは一次繊毛へ移行し、コレステロールによって活性化されます。 関連文献: PMID:27437577 PMID:28344083 PMID:32929279
• 活性化後、SMOはGタンパク質G(i)と共役し、アデニル酸シクラーゼを阻害してcAMPレベルを低下させます。これによりプロテインキナーゼA (PKA)の抑制が解除され、GLI転写因子の安定化と活性化が引き起こされます。 関連文献: PMID:28344083 PMID:31168089
• 活性型SMOはまた、その触媒サブユニットPRKACAを細胞膜に隔離することでPKAを直接阻害し、GLI転写因子のリン酸化とプロセシングを防ぐことができます。 関連文献: PMID:36202993 PMID:39138140
• SMOは主に細胞膜およびHedgehogシグナル伝達の重要な区画である一次繊毛膜に局在します。
• 本抗体は、セリン残基611および615でのリン酸化を特異的に認識します。これらの翻訳後修飾は、SMOのコンフォメーション、活性、または輸送に影響を与える可能性があります。
• SMOの変異は様々な発達障害や癌に関与しており、その重要な調節的役割が強調されています。

実験ガイダンスと技術的ヒント

• 免疫原は、ヒトSMOのSer611/Ser615周辺の合成リン酸化ペプチドです。ウェスタンブロットでは、約86 kDa付近にバンドが検出されることが期待されます。リン酸化特異性を確認するには、サンプルをラムダホスファターゼで処理するか、非リン酸化ペプチド競合体を使用することを検討してください。
• SMOのリン酸化状態は動的であり得るため、細胞溶解時にホスファターゼ阻害剤カクテルを使用することが推奨されます。また、適切な陽性対照および陰性対照（例：Hedgehog刺激細胞 vs 非刺激細胞）を含めてください。
• ウェスタンブロット検出には、ブロッキングおよび抗体希釈の最適化が必要な場合があります。濃度範囲をテストし、活性化されたHedgehogシグナル伝達を持つヒト細胞株または組織（例：SHH処理線維芽細胞）で検証してください。
• ELISAでは、本抗体はリン酸化SMOペプチドまたは細胞溶解物の検出に適している可能性があります。リン酸化特異性ペプチドと非リン酸化対照を用いて結合を確認し、特異性を評価してください。

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